胃癌(Gastric carcinoma)是常见恶性肿瘤之一。研究发现肿瘤的发生发展、转移、复发都涉及到基因的改变，其中包括原癌基因的激活以及抑癌基因的失活等。因此，研究与癌症相关的基因可以为诊断、治疗和防止癌症复发提供理论依据和实验基础。在众多与肿瘤相关基因中，Notch途径与肿瘤的密切关系引起关注。　　 自从二十世纪初在果蝇中发现Notch基因--因其部分突变可在果蝇翅膀的边缘造成缺口而得名。大量的研究表明，Notch信号途径在细胞增殖、分化和凋亡中起着重要的作用。当发现急性T淋巴细胞白血病发生与Notch受体有关时，Notch与肿瘤的关系受到关注。当配体与受体结合后，Notch受体经酶切水解释放其胞内段(NICD)，即Notch受体的活性形式。随后，NICD转移至细胞核内，与转录因子CSL结合，进而调控下游基因的表达。　　 前期研究得出了不同结果：Notch1在肿瘤中可能是癌基因，也可能是抑癌基因。这种结果的不一致可能与细胞的种类特性有关。本实验证明了Notch1在胃癌发生发展中起着抑癌基因的作用。Notch1可以显著地抑制胃腺癌BGC823细胞的体内外增殖作用。这种抑制作用与Notch1上调P21和下调Cyclin D1的表达有直接的关系，并使细胞周期受阻滞于G1期。Notch1通过上调Caspase-3和Bax以及下调Bcl-2，使BGC823细胞凋亡。　　 方法：　　 1、免疫组织化学方法染色采用EnVision方法对胃癌及胃正常组织进行免疫组织化学染色2、细胞培养(1)传代培养GES-1：含有10％胎牛血清的DMEM培养液，37℃5% CO2饱和湿度。　　 (2)传代培养胃癌BGC823、SGC-7901和AGS细胞株：含有10%胎牛血清的RPMI1640培养液，37℃5% CO2饱和湿度。　　 3、MTT法检测细胞增殖能力(1)比较人胃正常粘膜细胞GES-1与胃癌细胞BGC823、SGC7901和AGS增殖能力。　　 (2)检测活化Notch1对BGC823增殖能力影响。　　 4、Real-time RT PCRReal-time RT PCR比较Notch1在GES-1与胃癌细胞BGC823、SGC7901和AGS中mRNA表达水平5、Western blot分析(1)检测Notch1在GES-1与胃癌细胞BGC823、SGC7901和AGS蛋白质表达水平。　　 (2)鉴定稳定表达NICD的BGC823-NICD细胞株。　　 (3)活化Notch1对凋亡途径和细胞周期相关蛋白表达的影响。　　 6、流式细胞仪检测Notch1对细胞凋亡的影响7、流式细胞仪检测Notch1对细胞周期的影响8、裸鼠成瘤实验检测Notch1对BGC823体外增殖能力的影响结果1、Notch1在胃癌中表达下调(1)Notch1的表达定位于细胞浆和细胞膜，在胃癌组织和正常胃组织中表达的阳性率分别为38.9%(42/108)和72.7%(16/22)，差异有显著性(p<0.01)。Notch1表达与肿瘤的分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关(p<0.05)。Notch1的表达与肿瘤的大小无关(p>0.05)。　　 (2)Real-time RT RCR和western blot结果显示 Notch1 mRNA在GES-1和各胃癌细胞系均有表达，与GES-1相比较，Notch1 mRNA在AGS、SGC-7901和BGC-823的表达分别为65%，59%和61%。具有显著性差异(p<0.01)；三种胃癌细胞系Notch1 mRNA表达组间差异无显著性(p>0.05)。与GES-1比较，Notch1在AGS、SGC-7901及BGC-823细胞中蛋白质水平的表达分别是57.2%，47.9%和60.0%，差异具有显著性(p<0.01)，三种胃癌细胞系Notch1蛋白表达组间差异无显著性(p>0.05)。　　 2、MTT法检测MTT结果显示，AGS、SGC-7901和BGC-823胃癌细胞的增长速度均明显高于GES-1细胞株(p<0.05)，其中又以BGC-823的增长速度最快，其差异有统计学意义(p<0.05)。　　 3、活化的Notch1抑制BGC823细胞体内外增殖MTT和裸鼠成瘤实验结果表明Notch1能抑制胃癌BGC823细胞体内外增殖。　　 4、活化的Notch1能阻滞细胞周期与BGC823(53.23%)和BGC823-pcDNA(54.41%)比较，BGC823-NICD处于G1期细胞(68.72%)明显增多，相对于BGC(34.54%)和BGC823-pcDNA(31.31%)，BGC823-NICD的S期细胞(21.79%)明显降低，western blot结果显示上调的P21和下调的Cyclin D1与Notch1诱导的细胞周期阻滞有关。　　 5、活化Notch1诱导BGC823细胞凋亡BGC823-NICD细胞的凋亡率远大于BGC823、BGC823-pcDNA，说明Notch1能显著诱导BGC823细胞早期凋亡，Western blot结果显示，BGC823细胞中Hes1、Caspase3，Bax表达上调，Bcl-2下调与活化Notch1诱导凋亡有关。　　 结论：　　 1、Notch1在胃癌的发生发展中可能作为抑癌基因起作用。　　 2、活化Notch1能抑制BGC823细胞增殖，其机制与P21上调和CyclinD1下调有关。　　 3、活化Notch1能诱导BGC823凋亡，其机制与上调Caspase-3和Bax，以及下调Bcl-2有关。