论文部分内容阅读
Vacuolar (H+)-ATPase (V-ATPase)广泛分布在质膜及内膜系统中，是一种多亚基的质子泵。该酶能够水解ATP，转运质子，维持胞质pH平衡，形成跨膜电化学梯度。Vhasfd编码V-ATPase的H亚基，H亚基对V-ATPase正常功能的行使是必需的。有报道表明，沉默V型ATP酶的A或E亚基会对靶标生物产生重要影响。但是目前对H亚基的研究报道是很少的。东亚飞蝗(Locusta migratoria manilensis, Meyen)是我国重点防治的一种迁飞性农业害虫，对东亚飞蝗的研究以及对蝗灾的防治措施一直都被人们广泛关注。目前，使用有机磷类杀虫剂仍然是防治东亚飞蝗的主要手段，但长期使用杀虫剂会导致Resistence、Residue、Resurgence (3R)问题的产生。因此，开发低毒性、高效率、无残留、无公害的新型农药已经成为防治农业害虫的重要任务。对东亚飞蝗的基因进行克隆并研究其功能，分析其对东亚飞蝗生长发育是否有重要作用的基因，能否为新型杀虫药物的研发提供靶标的相关课题有重大意义。主要研究结果有：①克隆得到了编码东亚飞蝗V型ATP酶H亚基的基因，Lm-Vhasfd，该基因全长cDNA序列为2018bp，开放阅读框编码515个氨基酸残基。②半定量PCR结果分析表明，在所选取的各个组织中Lm-Vhasfd都有表达，在血淋巴、中肠、躯干和腿组织中高表达，在脂肪体和头组织中表达量相对低。③通过注射特异dsRNA，沉默Lm-Vhasfd的表达，检测V-ATP酶活性及ATP含量，结果显示在干扰3,5,7天有显著差异。④通过RNA干扰沉默Lm-Vhasfd基因的转录水平后，东亚飞蝗的存活率和蜕皮现象与对照组存在差异，实验组的东亚飞蝗在蜕皮过程出现不同程度的缺陷，并且在注射dsRNA11天后，RNAi组的累积死亡率达到96.7%。这与对照组相比是极具显著性的。