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目的联合运用Tricine-SDS-PAGE电泳、SELDI质谱技术和Western-blot技术,鉴定肾移植术后发生急性排斥反应患者血清中的高表达蛋白,寻找能为肾移植急性排斥反应的临床早期诊断与治疗提供可靠的、灵敏的实验室参考指标。方法利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, SELDI-TOF-MS)技术研究肾移植急性排斥组、稳定存活组以及疾病对照组血清中蛋白质组学的改变,发现一系列急性排斥反应的相关蛋白。这些蛋白中质荷比(mass charge ratio,M/Z)为11731和9285的两个蛋白血清中含量较高。挑选M/Z 11731蛋白含量高的标本作为研究对象。利用Tricine-SDS-PAGE电泳技术分离纯化蛋白、胰蛋白酶进行胶内酶解、SELDI-TOF-MS技术分析蛋白消化产物、获得蛋白的肽指纹图谱(peptides mass fingerprinting, PMF),在Profound蛋白数据库内进行比对。利用免疫印迹法(Western-blot)对鉴定出的蛋白进行进一步确认。进一步检测41份未经SELDI-TOF-MS技术分析的急性排斥反应和稳定存活组的血清标本,观察两组之间该蛋白是否存在显著差异性。并利用ROC曲线分析该蛋白鉴别急性排斥反应的诊断价值。结果经SELDI-TOF-MS技术获得PMF,所包含肽段M/Z分别为:1043.93、1068.52、1079.05、1095.20、1157.53、1293.60、1538.60、1717.94、1843.18、2614.44、2893.64、3004.98、3021.00、3149.33、3371.73、3395.91、3838.97、4539.083。在Profound蛋白数据库内初步检索得该蛋白为免疫球蛋白超家族的一员, Western-blot确认其为β2-MG。检测显示急性排斥反应组标本血清中β2-MG浓度明显高于稳定存活组,具有明显的统计学差异(P<0.01)。当β2-MG含量大于3.545 mg/L时,判断其为急性排斥反应的敏感性和特异性分别达到90%和90.5%。肾移植术后急性排斥反应患者血清β2-MG增高明显早于血清肌酐增高,也明显早于临床表现。结论联合SELDI-TOF-MS技术平台和western-blot鉴定出M/Z 11731蛋白为已知的β2-MG。实验证明两种技术结合鉴定未知蛋白是可行的。β2-MG与肌酐、临床症状及组织病理学相比,具有更高和更早期的临床诊断价值,为急性排斥反应的早期诊断、治疗以及研究病理机制提供了参考。