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核酶(Ribozyme, RZ)是一类具有酶活性的RNA分子，可序列特异性地与靶RNA分子配对，对底物进行切割，促进mRNA的降解，从而使其失去生物活性。其阻断有害基因表达的作用已得到证实。同反义核酸比较，核酶具有封闭和切割双重作用的特点，更重要的是核酶可以重复发挥催化作用，一个分子可以破坏多个靶RNA，在切割完一个靶RNA分子后，又可以从杂交链上解脱下来，对新的RNA进行切割反应。研究表明，核酶具有较单链的反义核酸更为稳定和简单的空间结构，不易受到核酸酶的破坏，因结构简单，可以人工设计。因此，核酶的发现为肿瘤基因治疗提供了更具特异性的新手段。目前用于基因治疗的核酶主要是锤头状核酶和发夹状核酶。 近年来的研究表明，宫颈癌的侵袭转移与COX-2、VEGF和MMP-9有关。因此，采用核酶技术阻断宫颈癌细胞中COX-2、VEGF和MMP-9的过量表达，有可能阻止肿瘤细胞的增殖、降低其侵袭能力，为宫颈癌开创一条新的治疗途径。研究内容包括： 1．脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞，分别为CaSKi-R和CaSKi-P。点杂交检测证实核酶在细胞中能够稳定表达，Northern杂交证实转染核酶的CaSKi-R细胞E6基因的表达明显减少，成功地将抗HPV16E6核酶导入CaSKi细胞。 2．观察细胞的生长状态，测定CaSKi，CaSKi-R和CaSKi-P三种细胞的生长曲线、软琼脂克隆形成率、细胞侵袭力实验、裸鼠体内成瘤性。结果发现CaSKi、CasKi一P细胞生长速率、软琼脂克隆形成率、成瘤性和侵袭力相近，而CaSKi一R细胞的细胞生长速率、软琼脂克隆形成率、致瘤性和侵袭力与以上两种细胞相比有明显降低。 3.应用RT一PCR技术检测细胞中COX一2、VEGF、MMP一9的表达。结果显示CaS儿一R细胞的COX一2、VEGF、MMP一9表达水低于CaS儿、CaS丸一P细胞的表达。 4.应用免疫组化检测CaSKi，CaSKi一R和CaSKi一P三种细胞COX一2、VEGF、MMP一9抗原表达。结果发现CaSKi、CaS儿一P和CaS幻一R细胞都有COX一2、VEGF和MMP一9抗原表达，而CaSKi一R细胞的抗原染色程度相对减弱。 综上所述，特异性抗HPV16E6核酶的导入降低了宫颈癌Cas丸细胞的增殖和侵袭表型，可能与随着HPVE6基因的表达减弱，宫颈癌CaS儿细胞内的COX一2、VEGF和MMP一9的表达水平也降低有关，本研究为降低宫颈癌恶性侵袭表型的基因治疗提供了一定的实验依据。