Tim-3分子在胃癌髓源性抑制性细胞上的表达及其生物学功能

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【目的】检测Tim-3分子在胃癌荷瘤个体髓源性抑制性细胞上的表达水平,并探讨Tim-3在胃癌发生和发展中的作用。【方法】1.收集2013年2月~2013年11月苏州大学附属第一医院收治的初诊胃癌患者(46例)及健康对照者(25例)外周血标本。流式细胞仪检测胃癌患者及对照组外周血中MDSCs上Tim-3的表达水平,并分析其与胃癌患者各临床病理特征的关系。2.构建胃癌荷瘤小鼠模型并检测不同时间荷瘤小鼠外周血、脾脏及肿瘤浸润组织中MDSCs上Tim-3的表达水平,动态研究MDSCs表达Tim-3规律。3.采用CFSE染色法共培养T细胞与MDSCs,并加入Tim-3阻断抗体进行干预,96小时后流式细胞仪检测T细胞增殖情况。【结果】1.胃癌组外周血中CD14+HLA-DR-/lowMDSCs上Tim-3在的表达水平(x±s,%)(32.57±15.887,%)高于对照组(7.52±5.943,%),差异有显著统计学意义(P<0.0001)。2.胃癌患者Tim-3在外周血中CD14+HLA-DR-/lowMDSCs上的表达水平与远处转移、临床分期的分组中有显著差异(P<0.01),而在患者年龄、性别、肿瘤直径、病理分化级别、浸润深度、淋巴结转移等各组中的差异无统计学意义(P>0.05)。有远处转移(M1)的胃癌患者CD14+HLA-DR-/lowMDSCs上Tim-3表达水平显著高于无远处转移(M0)者,分别为(42.34±11.857,%)、(27.36±15.435,%),P=0.0015,差异具有显著统计学意义;Ⅲ-Ⅳ期胃癌患者(35.82±15.299,%)较Ⅰ-Ⅱ期患者(18.40±5.956,%)明显增加,差异具备显著性(P=0.0030)。单因素方差分析不同分期胃癌患者的Tim-3表达水平,结果显示Ⅳ期(42.34±11.857,%)胃癌患者明显高于Ⅰ-Ⅱ期(18.40±5.956,%)以及Ⅲ期(31.07±16.000,%),差异有显著统计学意义(P=0.0006)。3.胃癌荷瘤小鼠外周血中MDSCs上Tim-3的表达水高于对照组,分别为(22.24±12.312,%)、(6.31±1.808,%),差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析不同荷瘤时间Tim-3在小鼠外周血中MDSCs上的表达水平,发现荷瘤23天组的小鼠Tim-3的表达水平(40.93±2.663,%)明显高于荷瘤8天组(11.50±1.127,%)、荷瘤13天组(13.61±2.410,%)和荷瘤18天组(22.93±3.140,%),差异有统计学意义(P<0.0001)。4.Tim-3在荷瘤组小鼠脾脏中MDSCs上的表达水平(15.51±7.631,%)高于对照组(3.46±1.126,%),差异有统计学意义(P<0.05)。Tim-3在不同荷瘤时间小鼠脾脏中MDSCs上的表达水平分别为荷瘤8天组(5.62±2.396,%)、荷瘤13天组(12.80±0.200,%)、荷瘤18天组(18.80±2.606,%)和荷瘤23天组(24.83±1.795,%),单因素分析显示差异具显著统计学意义(P<0.0001)。5.随着肿瘤的生长,Tim-3在肿瘤组织浸润的MDSCs上的表达水平逐渐升高,荷瘤23天组高于荷瘤8天组、荷瘤13天组及荷瘤18天组,分别为(54.33±7.560,%)、(12.83±1.124,%)、(27.50±1.153,%)和(30.97±2.301,%),差异有显著统计学意义(P<0.0001)。6.各组肿瘤组织浸润的MDSCs上的Tim-3的表达水平均高于脾脏,而在小鼠荷瘤13天后各组肿瘤组织中Tim-3的表达水平也高于外周血(P<0.05)。7.T细胞+MDSCs组增殖的T细胞所占比例为(35.43±11.357,%),低于T细胞组(72.47±2.532,%)及T细胞+MDSCs+Tim-3阻断抗体组(62.00±1.552,%),P=0.0014,差异有统计学意义。【结论】1.Tim-3在胃癌患者外周血中CD14+HLA-DR-/lowMDSCs上的表达水平上调,且与患者远处转移情况、TNM临床分期有关。有远处转移、分期晚的胃癌患者明显高于无远处转移、分期早者。提示Tim-3可能成为判断胃癌预后的潜在指标。2.荷瘤组小鼠外周血及脾脏中MDSCs上Tim-3的表达水平均高于对照组。随着胃癌肿瘤的生长,Tim-3在外周血、脾脏、肿瘤组织浸润的MDSCs上的表达水平逐渐升高,且肿瘤组织明显高于外周血、脾脏。提示MDSCs上Tim-3分子在胃癌肿瘤微环境中诱导表达。阻断Tim-3后可恢复部分T细胞的功能,提示Tim-3在MDSCs介导的T细胞应答中发挥了重要作用。
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