P-gp由mdr1基因编码,首次在耐药的中国仓鼠卵巢细胞中发现,是ABC转运家族中第一个被发现的与肿瘤细胞多药耐药相关的蛋白。P-gp能识别和转运许许多多化学机构与相对分子质量差别很大的物质,包括抗菌药物、抗病毒药、抗癌药物、免疫抑制剂、抗心律失常药等等。P-gp除了在癌细胞中高表达外,在正常的器官和组织中也有分布,主要定位于具有分泌和排泄功能的细胞上皮。肠道是主要的吸收器官,肝脏、肾脏是主要的代谢、排泄器官,定位在肠道、肝脏、肾脏的P-gp是影响其底物药代动力学的主要因素。近年来的研究发现,P-gp的表达存在物种差异,而目前关于P-gp的研究主要集中在人类和啮齿类动物,有关猪组织中P-gp定位以及相关功能的数据却非常有限,故本试验首先采用免疫组织化学的方法研究了多药耐药蛋白P-gp在健康仔猪肝脏、肾脏和肠组织中的定位情况,并采用real-time RT PCR方法检测了不同组织中mdr1的mRNA表达水平,同时进一步探讨了P-gp对氟喹诺酮类抗菌药恩诺沙星的药动学影响,为进一步研究P-gp的功能和调控奠定基础。首先,我们采用免疫组织化学方法对猪肠道、肝脏和肾脏中的P-gp进行了定位,采集5头60日龄健康仔猪的肝脏、肾脏、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠和直肠用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋后,连续5μm切片,37℃过夜烤片后,利用抗MDR1的抗体对以上组织中的P-gp进行组织定位。结果表明：P-gp主要定位于肝脏肝细胞间的胆小管膜上。在肾脏主要分布于近端小管和远端小管的细胞膜上。P-gp在小肠的不同部位也均有分布,主要位于于肠绒毛上皮细胞顶端及小肠腺腔面上皮细胞顶端。P-gp在大肠中主要分布在黏膜上皮细胞顶端和大肠腺上皮细胞顶端。然后选取gapdh为看家基因,采用real-time RT PCR方法检测了mdr1基因在健康猪十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、肝脏和肾脏中的mRNA表达水平,为进一步研究P-gp的功能提供参考。我们选取5头60日龄健康三元仔猪作为研究对象,宰杀后迅速取其组织置于液氮中,后转入-80℃冰箱保存,提取肝脏、肾脏和肠组织的总RNA,反转后对mdr1基因进行了相对定量。结果显示mdr1在猪肝脏、肾脏和各肠组织中均有表达,表达量由高到低依次为：回肠、结肠、肝脏、空肠、十二指肠、直肠、盲肠和肾脏。其中回肠表达量最高,且与十二指肠、直肠相比差异显著(P=0.017,P=0.014),与盲肠和肾脏相比差异极显著(P=0.005,P=0.001)。mdrl在空肠、结肠和肝脏中的相对表达量与肾脏相比差异显著(P=0.046,P=0.018,P=0.030)。进一步建立了高效液相色谱(HPLC)的方法用于实时监测猪口服恩诺沙星后在血浆中的药物浓度变化,检测P-gp抑制剂维拉帕米对猪口服恩诺沙星的药动学影响。试验选用8头健康60日龄三元仔猪,体重19-21kg,随机平均分为单剂量口服恩诺沙星组和维拉帕米处理组。恩诺沙星组动物单剂量(10mg/kg·bw)灌服恩诺沙星,维拉帕米处理组动物灌服维拉帕米(10mg/kg·bw)30min后,再灌服恩诺沙星(10mg/kg·bw),分别于0、0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、12和24h从前腔静脉无菌采血,4℃,3500rpm离心10min分离血浆,采用HPLC法测定血浆中恩诺沙星的药物浓度,用3p97药动学软件处理血药浓度-时间数据,计算药动学参数。结果显示：恩诺沙星在猪体内的药动学模型符合一级吸收一室模型,其吸收速率常数ka=0.82±0.11,达峰时间为Tpeak=2.01±0.09,血浆中峰浓度为Cmax=3.39±0.12,消除半衰期为T1/2ke=2.50±0.23,药时曲线下面积AUC(0-2h)=13.57±0.96;用维拉帕米处理后,能显著促进恩诺沙星的吸收速度,表现为吸收速率常数(2.08±0.11)、达峰时间(1.17±0.05)极显著低于恩诺沙星对照组(P<0.01)和AUC(0-2h)(16.50±0.44)显著高于恩诺沙星对照组(P<0.05)。但其他药动学参数如Cmax (3.85±0.15)、T1/2ke(2.85±0.22)与恩诺沙星组比较差异不显著(P>0.05)。综上结果,猪肝脏、小肠和肾脏中均有P-gp的分布和表达,其对氟喹诺酮类抗菌药恩诺沙星的体内过程具有一定影响,有必要对猪P-gp的功能及调控进一步研究。