论文部分内容阅读
禽白血病(avian leukosis,AL)是指由反转录病毒科禽反转录病毒属之禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV)引起的以禽类造血组织中一些类型的细胞大量增生而导致的一类传染性肿瘤疾病,给家禽业造成了巨大的经济损失。目前缺乏有效的疫苗和药物,只有通过种群的净化才能得到有效防控。但在净化检测过程中,不同检测方法之间结果有不一致的情况,不同的检测日龄的结果之间也有差别。本课题拟通过对广西地方品种鸡AL净化实践中的一些关键技术进行研究探讨,以及结合本人所在的育种公司开展“两白”净化工作进行研究,摸索适合本地优质品种种鸡场净化与防控的相关实用技术。在DGGX18公司地方优质鸡品种1的鸡群净化初始阶段,分别在23周龄、27周龄采集鸡只的全血并分离血浆,将血浆接种DF-1细胞培养后再进行P27抗原ELISA检测。结果显示23周龄的检测阳性率为46.05%,远高于27周龄的23.68%;选择DXGX11公司三个地方优质鸡品种鸡A、B和C,应用P27抗原ELISA检测的方法对同一母鸡初产的3枚蛋进行检测。结果发现品种A、B、C中,检测1枚蛋能够检测出的阳性数量分别为64只(阳性率5.65%,64/1132)、88只(阳性率3.53%,88/2496)和122只(阳性率12.56%,122/971)。检测2枚蛋能够检测的阳性数量分别为71只(阳性率6.27%,71/1132)、91只(阳性率3.65%,91/2496)和179只(阳性率18.43%,179/971)。检测3枚蛋能够检测的阳性数量分别为86只(阳性率7.60%,86/1132)、103只(阳性率4.13%,103/2496)和194只(阳性率19.98%,194/971)。DGGX11公司的三个地方优质鸡品种A、B、D母鸡在23周龄(检测3枚蛋)或40周龄(检测1枚蛋)同时进行蛋清P27抗原的ELISA检测,并采集其血浆接种DF-1细胞进行病毒分离检测。结果发现,品种A蛋清P27抗原和血浆病毒分离检测阳性的分别有17只(阳性率1.75%,17/974)和13只(阳性率1.33%,13/974),两者均为阳性的鸡为0只;品种B蛋清P27抗原和血浆病毒分离检测阳性的分别有37只(阳性率1.74%,37/2124)和72只(阳性率3.39%,72/2124),两者均为阳性的鸡有10只;品种D蛋清P27抗原和血浆病毒分离检测阳性的分别有26只(阳性率5.87%,26/443)和19只(阳性率4.29%,19/443),两者均为阳性的鸡有3只。在探究AL感染与鸡白痢的关系中,选用DGGX18公司地方优质鸡品种1、品种2及DGGX11公司的品种D分别进行试验,应用蛋清P27抗原ELISA检测(品种1、品种2)或血浆病毒分离(品种D)来检测ALV感染,鸡白痢则应用鸡白痢-鸡伤寒多价平板凝集抗原进行的血清平板凝集试验进行检测。结果发现,三个品种(品种1、2和D)鸡白痢阳性鸡中AL阳性率分别为26.00%、1.00%、11.72%,鸡白痢阴性鸡中AL阳性率分别为17.84%、0.38%、8.76%。对DGGX11公司刚刚开展净化的地方品种D用临床发病鸡肿瘤组织样品及该品种用于净化的无菌血浆样品,分别接种于DF-1细胞,经对细胞培养物进行ALV的P27抗原之ELISA及PCR检测后,证实分别分离到了5株ALV-J临床样品分离株和5株ALV-J净化样品分离株,并对10株ALV-J的env基因进行序列测定与分析。BLAST比对结果显示,10个分离株均属于ALV-J。其env基因及gp85基因系统进化树分析结果显示,它们均与ALV-J参考株处在同一个分支,且10个分离株聚集在一个分支并可进一步分成两个小分支。第一个分支有7个毒株(包括3个临床分离株和4个净化分离株)聚集,表明这些临床病例分离株与种鸡群净化分离株具有共同的来源,推测净化不彻底是造成临床发病的主要原因之一。此外,第二个分支有3个毒株(包括2个临床分离株和1个净化分离株)聚集,它们与污染疫苗分离株GX14ZS14处在同一个小分支,表明种鸡群的感染以及临床的病例还存在有污染活疫苗携入的途径。本课题研究表明,在AL净化中,23周龄进行血浆病毒分离的阳性率高于27周龄;母鸡开产时检测3枚蛋比检测1枚和2枚蛋的阳性检出率要多;血浆病毒分离检测与蛋清ALV-P27抗原的检测阳性符合率低;鸡白痢检测阳性的鸡中AL阳性的要多于鸡白痢检测阴性鸡的;通过对种鸡群净化检测分离毒株及临床病例分离株的基因序列的比较分析,明确了公司种鸡群ALV的污染来源和传播途径。