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本课题以肝癌细胞HepG2为研究对象。在小瓶培养的基础上,对HepG2进行规模化扩大培养,建立了 HepG2滚瓶培养方法,之后研究了硒酸壳聚糖诱导HepG2凋亡的效果和作用机理。本实验首先对转速进行了探索,通过单因素试验确定了滚瓶培养HepG2的初期贴壁转速及贴壁后转速的范围。之后以细胞接种量、培养时间、转速、培养基用量为自变量,进行了四因素三水平的正交试验。通过分析得出细胞接种量和培养时间对细胞产量具有显著的影响(p< 0.05)。结合单因素试验和正交试验,最终确定了滚瓶培养HepG2的最佳方案:初期贴壁转速10r/h,贴壁后转速20r/h,细胞接种量4×107个/瓶,培养时间48 h,培养基用量150 mL。在确立HepG2的滚瓶培养方法的基础上,研究了硒酸壳聚糖对滚瓶培养的HepG2的诱导凋亡效果。MTT试验确定了硒酸壳聚糖抑制HepG2增殖的最佳作用浓度,通过扫描电子显微镜观察,罗丹明123染色和Annexin V-FITC/PI双染等实验证明硒酸壳聚糖作用HepG2后均出现了凋亡相关现象。通过流式细胞仪检测发现硒酸壳聚糖作用24 h、36 h和48 h时,HepG2细胞的凋亡率分别为12.33 %,63.63 %,81.00 %,且细胞周期在S→G2期和G2→→M期均被阻滞。通过蛋白质组学对比分析了硒酸壳聚糖作用前后的HepG2的蛋白图谱,发现了14个表达差异蛋白点,其中10个表达下调,4个表达上调。将表达差异最为显著的9个蛋白点进行MALDI-TOF/TOF-MS鉴定,共鉴定出4个差异.蛋白,分别为细胞色素C氧化酶类、钙调素、微管蛋白类和肌球蛋白类,通过对其功能的研究结合表达量下降,可以推断出硒酸壳聚糖诱导HepG2细胞凋亡的机制是线粒体途径和阻碍细胞周期循环。