牛卵母细胞成熟过程中颗粒细胞扩散与凋亡相关性研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Truth_Tiger
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正常生理和卵泡发育过程中,颗粒细胞分为卵巢颗粒细胞(mural granulosacell,mGCs)与卵丘颗粒细胞(cumulus cells,CCs),分别表达自身特有的转录。两者有着明确的分工:CCs影响卵母细胞成熟,而mGCs主要起内分泌功能。当卵丘卵母复合体(COCs)从卵泡中移除之后进行体外培养时,COCs与mGCs的分泌因子是相分离的。卵母细胞与其周围的颗粒细胞之间的通讯,对于卵母细胞发育以及颗粒细胞分化来说是至关重要的,卵母细胞依赖于分化了的CCs,CCs提供营养物质和调节信号来促进卵母细胞的核成熟以和质成熟以及发育能力的获得;另外卵母细胞可以促进颗粒细胞的增殖与分化以及相关基因的表达,在第一极体排出之后,一个对卵母细胞重新开始减数分裂的必须事件是卵丘颗粒细胞所发生的扩散,这对于排卵是重要的。在成熟过程中,卵丘颗粒细胞发生扩散现象,证明扩散现象与卵母细胞成熟有着某种关系,扩散现象是由于颗粒细胞自身与扩散相关基因的表达引起,而卵母细胞在扩散过程中也起到相当重要的作用。颗粒细胞为卵母细胞成熟提供一些分泌因子影响刺激成熟,反过来,卵母细胞成熟后分泌某种物质来刺激扩散。本研究的目的在于:(1)检测扩散的颗粒细胞中相关基因的表达情况;(2)加入GSK3抑制剂之后对卵母细胞成熟以及颗粒细胞扩散的影响;(3)GSK3抑制剂对颗粒细胞凋亡的影响。结果:(1)扩散的颗粒细胞中,与扩散相关的基因如GDF9、HAS2、PTGS2、PTX3以及Tnfaip6基因均有表达;(2)在卵母细胞体外培养成熟成熟时加入BIO时,促进卵母细胞的成熟,但并不显著;对颗粒细胞的扩散有促进作用,正常情况下,用BSA配制的牛卵母细胞成熟培养液来培养卵母细胞时,颗粒细胞本不发生扩散,但是加入GSK3通用型抑制剂之后,颗粒细胞发生扩散,卵母细胞成熟情况与上述类似。(3)卵母细胞成熟之后脱颗粒,将收集的颗粒细胞单独培养时,分A/B两组,A组中加入BIO,B组为对照组,结果发现在短时间内两组细胞生长状况相似,但是随着培养时间的增加,会发现加入BIO的A组生长状况明显优于对照组。(4)GSK3抑制剂对颗粒细胞的凋亡有一定程度的减缓作用。结论:颗粒细胞的生长、增殖、凋亡与GSK3基因有关,由于GSK3作为Wnt信号通路的一个重要节点,所以GSK3对Wnt信号通路起抑制作用,在这种情况下,Wnt信号通路被抑制,颗粒细胞只是单纯性的生长增殖但并未发生扩散,但是BSA培养液在加入GSK3抑制剂之后发生扩散,与在在血清培养液的情况下发生扩散一样,说明血清中有类似GSK3抑制剂的物质存在。加入GSK3抑制剂的培养体系中,卵母细胞在第一极体排出率上有一定上升,证明在正常情况下,GSK3抑制剂抑制GSK3之后,激活Wnt通路,对卵母细胞的成熟起稳定加成的作用。由于加入GSK3抑制剂的颗粒细胞在促凋亡Bax基因的表达量下降,而抗凋亡基因Bcl2表达量相差不大,促凋亡基因Bax的下降下降,说明抑制剂对Bax促凋亡基因的抑制作用更明显,抑制剂对颗粒细胞凋亡有抑制作用。所以,Wnt信号(GSK3抑制剂)对颗粒细胞的生长增殖期促进作用,对凋亡起缓解作用,反过来讲,可以概括为GSK3可以抑制颗粒细胞生长增殖,但对凋亡有一定程度的促进作用。
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