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沙门氏菌（Salmonella）具有极其广泛的动物宿主,是一种重要的人兽共患病原菌。迄今为止沙门氏菌共有2700种以上血清型,其中两个主要的血清型为肠炎沙门氏菌（Salmonella enteritidis）和鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）。由肠炎沙门氏菌引起人的急性胃肠炎,在世界各国有增加的趋势,已成为国际公共卫生的一个重要课题。目前,临床上常采用药物控制的方法以减轻沙门氏菌的危害,但造成了细菌耐药性和药物残留等一系列问题。由于多重耐药沙门氏菌不断出现,基于食品安全以及公共卫生安全等方面的考虑,疫苗接种免疫预防沙门氏菌病/感染是一个理想的选择。较灭活疫苗和亚单位疫苗而言,沙门氏菌基因工程减毒活疫苗能更有效地激发宿主的体液免疫和细胞免疫。研究表明沙门氏菌毒力岛（Salmonella Pathogenicity Island,SPI）是沙门氏菌染色体上成簇分布的编码毒力相关基因的特定区域,与沙门氏菌的致病性密切相关。沙门氏菌较为重要的毒力基因主要在SPI-1和SPI-2上,其中ssr AB位于SPI-2,hil A和hil D位于SPI-1。本研究在前期利用基因工程技术将宠物犬源肠炎沙门氏菌G9（亲本株）成功构建的4株肠炎沙门氏菌基因缺失减毒株[G9（Δhil A）、G9（Δhil D）、G9（Δssr ABhil A）和G9（Δssr ABhil Ahil D）]的基础上,进一步开展免疫原性、免疫保护性和生物安全性的评价研究,从而为该基因缺失减毒株在免疫预防肠炎沙门氏菌病/感染中的应用提供科学依据。本研究以G9（Δhil A）、G9（Δhil D）、G9（Δssr ABhil A）、G9（Δssr ABhil Ahil D）为受试菌株,昆明小鼠为实验动物模型。首先,采取灌胃接种不同剂量的受试菌株,根据免疫小鼠死亡率及血清Ig G抗体效价,确定受试菌株的最佳免疫剂量。其次,根据受试菌株的最佳免疫剂量免疫小鼠,继而采用间接ELISA方法检测血清Ig G和肠道黏膜lg A效价,以及血清中细胞因子（IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1）水平;流式细胞术测定CD4+/CD3+、CD8+/CD3+T细胞亚群;MTT法测定脾淋巴细胞增殖指数;攻毒试验测定免疫保护力和交叉免疫保护力,以及病理组织学变化。最后,采用倾注平板法测定受试菌株在小鼠体内定殖量;PCR鉴定以及基因测序测定受试菌株遗传稳定性。结果显示:受试菌株的最佳免疫剂量为5×107CFU。以5×107CFU/0.2m L/只剂量灌胃小鼠并在2周后以相同剂量加强免疫,连续4周试验期内,G9（?hil D）诱导血清Ig G抗体效价最高,高于G9,其次依次为G9（?ssr ABhil Ahil D）、G9（?ssr ABhil A）、G9（?hil A）,显著高于对照组（P<0.05）;产生肠黏膜Ig A抗体效价最高为G9（?hil D）和G9（?ssr ABhil Ahil D）,高于G9（?ssr ABhil A）、G9、G9（?hil A）（P<0.05）;与G9相比受试菌株诱导免疫相关细胞因子（IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1）水平差异不显著（P>0.05）;受试菌株刺激产生的CD4+/CD3+、CD8+/CD3+T细胞比率呈上升趋势,其中G9（?ssr ABhil A）和G9（?ssr ABhil Ahil D）与G9差异不显著,且G9（?ssr ABhil A）和G9（?ssr ABhil Ahil D）显著高于G9（?hil D）和G9（?hil A）（P<0.05）;G9（?ssr ABhil Ahil D）诱发脾淋巴细胞增殖指数与G9差异显著（P<0.05）,并高于G9（?hil A）、G9（?hil D）、G9（?ssr ABhil A）（P<0.05）。受试菌株免疫小鼠对10LD50的G9攻毒提供保护率为80%～100%,小鼠肝脏、脾脏及小肠绒毛结构较完整,无明显病理变化,对10LD50的鼠伤寒沙门氏菌攻毒提供保护率为50%～80%。受试菌株在小鼠肝脏、脾脏及小肠中能快速清除,接种后12天能基本清除其体内定殖的菌株,且在体外连续传代30代能够稳定遗传。结果表明:G9（Δhil A）、G9（Δhil D）、G9（Δssr ABhil A）和G9（Δssr ABhil Ahil D）具有良好的免疫原性、免疫保护力及交互保护力,符合研制肠炎沙门氏菌病/感染活疫苗的菌株生物安全性要求,具有在制备肠炎沙门氏菌基因工程减毒活疫苗中的应用前景。