【摘 要】
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蒙古马是我国优良的地方家畜品种,经过多年的遗传改良,每年有大量的优秀蒙古马参加各类竞技比赛,因训练和竞技比赛导致的运动损伤的临床治疗成为亟待解决的实际问题。骨科疾病尤其是软骨疾病一直被认为是医学界的疑难杂症,因软骨周围血管分布极少,修复因子及营养物质难以运输至损伤部位。因此干细胞定向分化为骨科疾病的治疗提供了可能,其中骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMS
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蒙古马是我国优良的地方家畜品种,经过多年的遗传改良,每年有大量的优秀蒙古马参加各类竞技比赛,因训练和竞技比赛导致的运动损伤的临床治疗成为亟待解决的实际问题。骨科疾病尤其是软骨疾病一直被认为是医学界的疑难杂症,因软骨周围血管分布极少,修复因子及营养物质难以运输至损伤部位。因此干细胞定向分化为骨科疾病的治疗提供了可能,其中骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)就是理想的种子细胞来源。circRNA(Circular RNA,circRNA)作为重要的非编码家族成员之一,参与机体众多的生物学过程,在软骨细胞分化过程,也发挥着重要作用。本研究通过对蒙古马BMSCs诱导分化为软骨细胞进程中三个不同时间点(0d、14d、21d)细胞采用高通量测序技术获得全转录组数据,经生物信息学分析及分子生物学验证,筛选出在BMSCs向软骨细胞分化中的差异circRNA及m RNA,结合前期micro RNA的研究基础,进一步探究circRNA在BMSCs向软骨细胞分化中的调节作用,研究结果将对赛马运动损伤的细胞分子治疗提供可能。得到以下结果:1.测序分析结果显示,14d-0d组、21d-0d组及21d-14d组中获得差异表达circRNA分别为15个、23个及15个,差异表达m RNA分别4011个、3592个、及1049个。2.GO分类显示,差异表达circRNA主要在转录调控、质膜粘附分子结合、细胞增殖调控及细胞识别等生物进程显著富集。KEGG富集显示,多富集于Toll样受体、细胞粘附、TNF、Erb Bc、破骨细胞分化、Hippo、糖胺聚糖生物合成及wnt等信号通路。但不同组间的circRNA转录谱和富集通路存在差异。3.circRNA/m RNA靶标micro RNA分析及结合位点预测表明,3个circRNA(circRNA299、circRNA688、circRNA440)、3个micro RNA(micro-PC-5p-87201_5、micro-PC-3p-183030_3、micro-PC-5p-113587_4)及4个m RNA(SOS1、PIK3R1、CREB1、BRAF)间存在相互结合位点。4.经qRT-PCR鉴定分析了差异表达的circRNA688、PIK3R1、CREB1、FOXO1,与测序结果一致,在21d-0d组中均为上调表达。综合分析,最后筛选出影响BMSCs向软骨细胞分化的4条可能分子通路,分别为circRNA688—micro-PC-3P-183030_3—PIK3R1、circRNA688—micro-PC-3P-183030_3—CREB1、circRNA299—micro-PC-5P-87201_5—SOS1及circRNA440—micro-PC-5P-113587_4—BRAF,并绘制了关联分析网络图。
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