利用反向线状印迹及高通量技术分别检测蜱体内梨形虫及全沟硬蜱体内细菌研究

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梨形虫病是由顶复门、梨形虫目,巴贝斯属和泰勒属的宿主特异性血液原虫引起的原虫病的总称,巴贝斯属和泰勒属分别引起巴贝斯虫病和泰勒虫病。蜱是一类有害的吸血外寄生虫,是梨形虫病的主要传播媒介。蜱可以通过直接的接触和吸血过程,或者通过传播细菌,原生动物或病毒病对宿主造成寄生性损伤。在热带和亚热带地区,梨形虫病可导致家畜和野生动物的临床障碍。这种疾病造成的经济影响包括:肉类和奶制品产量降低,流产,生育能力降低,较高的预防与治疗成本,以及对全球动物和动物制品行业造成数十亿美元的经济损失。本文的研究结果包括两个方面:1.利用建立的反向线状印迹杂交技术对采自中国不同省份草地或动物体表的不同蜱种所携带的梨形虫虫种进行调查,2015年三月至六月对样品进行收集。结果表明,RLB检测方法具有高度的特异性,可以区分不同的梨形虫虫种,通过构建的重组质粒,计算其敏感性可达到102拷贝/μL。草地上收集的蜱样品可检测到单一或混合感染的情况,环形泰勒虫(33/408,8.1%)和新疆巴贝斯虫未定种(30/408,7.4%)的检出率最高。利用建立的RLB检测方法,对动物体表收集的蜱样品评估传播牛羊巴贝斯虫和泰勒虫虫种的潜在威胁。结果显示单一的环形泰勒虫(118/652,18.1%)感染和吕氏泰勒虫+中华泰勒虫(18/652,2.8%)混合感染的情况最为常见。许多蜱种所携带病原范围比以前报道的更广。2.利用建立的反向线状印迹杂交技术对采自我国黑龙江省的25只全沟硬蜱携带梨形虫种进行调查,同时在16S rRNA基因V4高变区域的基础上,利用高通量测序法对25只全沟硬蜱的细菌种类分布进行分析研究。RLB检测结果显示,所检测的全沟硬蜱没有发现感染或携带任何泰勒虫或巴贝斯虫虫种。通过全沟硬蜱样品的高通量测序显示,检测到200多个细菌属,其中一些对动物或人类具有潜在的致病重要性,一些细菌属可对环境造成污染。根据测序结果,我们发现了立克次氏体和伯氏疏螺旋体这些对人和动物具有致病性的蜱传细菌病原。综上所述,所建立的特异性RLB检测方法可以同时检测和鉴别不同巴贝斯虫和泰勒虫,该方法可作为一种潜在的诊断工具。同时,兽医从业人员应该对环形泰勒虫在中国的广泛流行提高意识,蜱对不同梨形虫种的传播能力需要通过动物传播实验进一步验证。同时应该对我国黑龙江省分布的携带多种病原体的全沟硬蜱对人及动物叮咬引发的疾病的威胁提高意识。
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