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视网膜作为神经组织的延伸,损伤后不能再自我修复,仅代以神经胶质,功能完全丧失,因此视网膜疾病的治疗尤为棘手。随着干细胞的研究不断深入,期望能够将视网膜干细胞在体外进行培养扩增并且移植回体内,以修复受损的视网膜组织。
目的:探讨体外分离、培养和扩增SD大鼠胚胎鼠的视网膜干细胞的方法。探讨成年SD大鼠视网膜损伤模型建立的方法。研究用5-溴脱氧尿嘧啶(5-Brdu)标记视网膜干细胞的方法。探讨SD大鼠胚胎鼠的视网膜干细胞的移植,对术后移植区的形态学观察。
材料和方法:取20只SD大鼠胚胎鼠的视网膜组织,采用酶消化的方法获得单个细胞,在干细胞选择性培养基中培养,观察原代和传代细胞的生长状况,并用免疫细胞化学的方法来检测巢蛋白(NESTIN)的表达。应用视神经钳夹的方式对成年SD大鼠的制作视网膜损伤模型。5-Brdu标记一代细胞,通过玻璃体腔注射入损伤模型眼,2周后摘除眼球进行光镜观察。
结果:SD大鼠胚胎鼠的视网膜干细胞在体外悬浮生长成致密的球形细胞团,传代后也能够生成新的细胞团,原代和传代细胞NESTIN蛋白均表达阳性。视神经钳夹方法制作的视网膜损伤模型,经电生理(ERG)检测以后ab波波峰均有下降,且光镜下观察视网膜各层细胞数量减少,结构破坏,证明模型制作成功。将标记有5-Brdu的一代细胞移植模型眼后,光镜下可见移植细胞整合入视网膜组织。
结论:SD大鼠胚胎鼠的视网膜干细胞可以进行体外培养和扩增,通过玻璃体腔注射的方法移植入视网膜损伤的眼中。移植2周后的细胞存活并且整合入视网膜组织。