长链非编码RNA CACNA1G-AS1在瘢痕疙瘩中的功能探究

来源 :北京协和医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhanggang406
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背景:瘢痕疙瘩一种良性的皮肤增生性疾病,但由于其侵袭周边正常组织,会造成患者的功能障碍和外形缺陷,加上其反复复发的特性,常常伴有的瘙痒和疼痛症状,严重影响了患者的生活质量。瘢痕疙瘩发病原因未明,治疗上缺乏公认的有效手段,是目前整形美容外科治疗的一大棘手问题。长链非编码RNA(1ncRNA)是一类长度大于200bp的非编码RNA,从转录水平、转录后水平、表观遗传学等层面参与了诸多细胞进程如细胞周期和增殖、分化、凋亡的调控,部分lncRNA被发现参与恶性肿瘤、皮肤疾病的发生发展中。目前,世界范围内尚未有对瘢痕疙瘩lncRNA的研究报道.在我们课题组的前期研究中,发现了 lncRNA CACNA1G-AS1(CAS1)在瘢痕疙瘩组织中存在特异性高表达,提示其可能参与到瘢痕疙瘩形成机制中。目的:在国内外范围内,首次探究CAS1在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的生物学功能,如对细胞增殖、细胞迁移、分泌细胞生长因子TGF-β、分泌Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白、调控钙通道蛋白Cav3.1表达等的影响,以期发现治疗瘢痕疙瘩的潜在靶点。方法:取北京协和医院整形美容外科就诊的3名瘢痕疙瘩患者(签署知情同意书)的部分瘢痕疙瘩组织进行成纤维细胞原代及传代培养,利用siRNA技术干扰CAS 1的表达,检测转染效率及干扰效率达到要求后,再应用细胞增殖检测和细胞周期流式检测技术探究对细胞增殖的影响,利用划痕实验探究对细胞迁移的影响,利用qRT-PCR技术探究对细胞因子TGF-β、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白分泌的影响,以及对钙通道蛋白Cav3.1 mRNA(即CACNA1G)表达的影响,与转染阴性对照序列的对照组进行对比。结果:(1)干扰CAS1表达的实验组与对照组相比,CAS1的干扰效率达到50%以上,可以进行下一步实验。(2)在qRT-PCR检测中,实验组的CACNA1G和Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显降低,分别为对照组的47%和59%;(3)划痕实验中,实验组的划痕愈合时间比对照组明显延长;(4)实验组qRT-PCR中TGF-β和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达含量、细胞生长曲线和周期检测与对照组相比,并无明显差异。结论:瘢痕疙瘩中特异性表达增高的CAS1可能促进了钙通道蛋白CACNA1G、Ⅰ型胶原蛋白的表达,并对细胞迁移有积极影响。
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