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孤啡肽(N/OFQ)作为一种内源性阿片肽类受体，属于G蛋白耦联受体，其在中枢和外周组织分布广泛。该基因在整个脑部区域有较高表达，可能在摄食及能量代谢过程中存在相应的调节作用，而且该基因的神经解剖学定位与能量平衡相关区域相一致。为进一步研究小鼠N/OFQ基因所编码蛋白质的生物学功能，本试验以昆明小鼠为研究对象，根据NCBI中公布的N/OFQ基因序列，设计其克隆引物，利用RT-PCR方法克隆小鼠N/OFQ基因，并构建其原核表达载体pET-28-N/OFQ，以浓度为1.0mmol/L的IPTG诱导其蛋白表达，最后通过SDS-PAGE和Western blotting检测该蛋白。主要结果如下: 1、小鼠N/OFQ基因的克隆及生物信息学分析从小鼠脑组织抽提总RNA，运用RT-PCR技术克隆了N/OFQ基因。克隆的鼠N/OFQ基因包含一个完整的ORF，长度为564bp，编码187个氨基酸，其中酸性氨基酸39个，碱性氨基酸29个，蛋白质分子量为:21.71kDa，等电点为:8.70。通过软件分析发现，其氨基酸序列与羊和牛的同源性最高，分别为98.3％和87.5％，与人、褐鼠、猕猴、貂、家兔和猪的同源性分别为83.3％、82.4％、85.2％、85.2％、78.4％和85.8％。系统进化分析显示其与褐鼠的亲缘关系最近，同在一枝上，与其他物种的亲缘关系相对较远。 2、小鼠N/OFQ基因的原核表达为了获取N/OFQ的蛋白质分子，本试验根据克隆所得序列设计合成一对表达用引物，将小鼠N/OFQ的ORF片段亚克隆至原核表达载体pET-28 a(+)中，经菌液PCR、双酶切及测序鉴定后，确定成功构建了N/OFQ基因的原核表达载体，将其命名为pET-28-N/OFQ。 将成功构建的重组质粒pET-28-N/OFQ转化入大肠杆菌Rosetta中，以终浓度为1.0mmol/L的IPTG，于30℃条件下，诱导6h，诱导产物处理后，通过SDS-PAGE电泳和Western blotting进行验证。利用6×His Ni-NTA纯化柱纯化所得蛋白。经SDS-PAGE电泳显示，在相对分子量约20kDa处有单一目的条带，表明融合蛋白在大肠杆菌中得以表达。纯化后的蛋白经Western blotting检测表明，获得的蛋白为目的蛋白N/OFQ。 本研究成功克隆了小鼠N/OFQ基因，并构建其原核表达载体，通过原核表达得到了目的蛋白，为进一步研究小鼠N/OFQ基因的生物学功能奠定了试验基础。