第一部分高效液相色谱—紫外检测法同时测定动物组织中多种磺胺残留量的研究 磺胺类药物(SAS)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类抗菌药物的总称，抗菌谱广，被广泛的用作饲料的添加剂，主要是用来增肥小牛和猪[1]。同时，磺胺类药也用做一种兽药来治疗肠道感染、乳腺炎、肺炎等疾病，并可以残留在动物的体内。该类药物如不按规定使用易导致球虫产生耐药性或引起交叉耐药性，长期连续用药可引起毒性反应。磺胺类药物的副作用有过敏反应、尿和造血紊乱。致癌性物质磺胺二甲嘧啶，能引起人的再生性障碍性贫血，粒细胞缺乏症等疾病。目前，中国、欧盟、日本、美国等均将磺胺类药物列为动物饲养过程中限制使用的药物，其最大残留限量要求为50～100μg/kg，而日本对磺胺二甲嘧啶的最大残留限量要求为10μg/kg左右[3]。目前，国内也有不少关于动物源性食品中磺胺类药物检测的液相色谱法报道，但由于检测项目单一[7-9]，或采用梯度洗脱[3，10]，操作过程复杂，不易实现，而不能满足全方位的要求，在实际应用中受到一定的限制。因此，建立一种采用等度洗脱紫外检测同时测定各国重点监控的9种磺胺类药物残留的通用方法已成为必需。 目的：建立高效液相色谱—紫外检测法同时测定动物组织中9种磺胺类药物残留量的方法，满足我国食品安全和各国对动物源性食品中磺胺类药物残留限量检测的要求。 方法：①样品的预处理：肉类样品称取2.5g，肠衣样品称取5g，将样品用0.1mol/L的醋酸酸化后，用乙酸乙酯提取，提取液经冷冻除去类脂物后，利用SCX柱固相萃取净化，最后用25％氨水甲醇溶液洗脱，洗脱液浓缩后用流动相定容0.5mL。②色谱条件的优化：选择色谱柱、检测波长和流动相的组成、比例、流速，使9种磺胺类药物分离且与杂质峰分开。同时使分离度、理论塔板数、对称因子符合检测要求。③方法学考察：分别进行精密度实验、线性、回收率、最低检测限实验。 结果：①色谱条件：色谱柱为CloversilODS-UC18柱(中检卫康公司)5μm，4.6mm×250mm；流动相为甲醇-乙腈-0.1％乙酸水溶液(20：10：70)；流速为1.0mL/min；检测波长为264nm；柱温35℃；进样量为30μl。②色谱系统适用性试验：9种磺胺标准的理论塔板数，最小的磺胺嘧啶为6742，相邻两者之间的分离度以磺胺对甲氧嘧啶和磺胺二甲嘧啶最小为1.42，不对称因子为0.91～1.33。⑧方法学试验：所分析的磺胺类药物在5.00×10-2～1.00μg/mL的浓度范围内线性关系良好(r＞0.999，n=5)，磺胺类药物在鸡肉中三个不同的添加水平，回收率在58.3％～101.0％，RSD值为3.75％～7.95％。 结论：本文建立了同时测定动物组织中9种磺胺类药物(磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲基异恶唑、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹恶啉)残留的高效液相色谱—紫外检测方法，作为一种通用方法，该方法净化效果好，分离度高，灵敏度能够满足各国对出口动物性食品中磺胺类药物残留限量检测的要求。 第二部分高效液相色谱—荧光检测法同时测定动物组织中多种磺胺残留量的研究 目前，国内外有不少关于动物源性食品中磺胺类药物残留的液相色谱检测报道。多数采用紫外检测法，而很多物质在紫外区有吸收，易造成干扰，致使净化过程十分复杂，且多残留分析多采用梯度洗脱，在实际应用中受到一定的限制。前文建立高效液相色谱—紫外检测法同时测定动物组织中9种磺胺残留量的检测方法，由于中华人民共和国动物及动物性食品中残留监控计划要求增加检测水产品中磺胺吡啶和磺胺噻唑残留量，采用紫外检测法与以上9种磺胺同时测定时，对于某些水产品，此两者不易与杂质分离，形成干扰。本文利用荧光检测法对磺胺类药物进行测定，使用荧光胺对磺胺类药物进行衍生，同时在流动相中加入三乙胺，形成离子对，首次采用等度同时测定动物组织中的11种磺胺类药物残留。在简化净化过程的基础上，显著提高灵敏度，大大缩短了检测时间，具有一定的专属性。本方法可同时满足欧盟、日本等国的出口要求和中华人民共和国动物及动物性食品中残留监控计划。 目的：简化测定动物组织中磺胺类药物残留预处理方法，建立一种专属性强的高效液相色谱—荧光检测法同时测定动物组织中11种磺胺类药物残留的检测方法。 方法：①样品的预处理：称取5.0g已粉碎均匀的动物组织样品，加入无水硫酸钠后用25mL乙腈提取，在3000rpm离心10min。准确分取5mL提取液于15mL离心管中，40℃用氮气吹干。用1mL流动相溶解。加入2mL正己烷除去类脂物，流动相层经荧光胺衍生后，待测定。②色谱条件的确定：改变色谱柱、检测波长和流动相的组成、比例、流速，使11种磺胺类分离且与杂质峰分开。同时使分离度、理论塔板数、对称因子符合要求。③方法学考察：分别进行精密度实验、线性、回收率、最低检测限实验。 结果：①色谱条件：色谱柱为ODS-2HYPERSILC18柱(ThermoElectronCoporation)5μm，250mm×4.6mm(i.d.)；流动相为乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾溶液(25：75)，利用三乙胺将流动相pH值调节为5.5，流速为1.0mL/min；检测波长为λex=405nm，λem=495nm；柱温为50℃；进样量为20μL。②色谱系统适用性试验：11种磺胺标准的理论塔板数以最小的磺胺嘧啶计为30093，相邻两者以磺胺甲氧嗪和磺胺吡啶的分离度最小，为1.40，不对称因子为0.90～1.16。③方法学试验：磺胺类药物在2.00～1.00×102ng/mL的浓度范围内线性关系良好(r＞0.999，n=6)，回收率和精密度较好。 结论：利用荧光检测法建立了一种快速、准确同时测定动物组织中11种磺胺类药物(磺胺嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺塞唑、磺胺喹恶啉、磺胺甲氧嗪、磺胺吡啶和磺胺二甲嘧啶)残留量的检测方法，该方法净化方式简单，专属性强，灵敏度高，可满足各国对动物性食品中磺胺类残留限量检测的要求，适合大批量样品的同时测定。