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巩膜成纤维细胞(scleral fibroblasts)是巩膜的主要细胞成分,它与其生成的胶原纤维等细胞外基质共同构成除角膜外的眼球外壁,维持眼球组织的完整并决定了眼轴的长度。巩膜属于致密结缔组织,细胞种类单一,以巩膜成纤维细胞为主,是与近视形成关系最为密切的眼组织之一。它的结构、生化及细胞生物学改变在近视的发生发展中起着关键性的作用,如巩膜薄弱易于伸展是眼轴延长导致PM的直接原因。细胞生长因子(growth factors, GF)是一类调节细胞生长增殖的多肽类物质,它们是导致细胞增殖效应的信息分子,在细胞生长、分化的调控和信号转导过程中有重要的作用。有关形觉剥夺性近视(form-deprivation mvopla, FDM)的研究证明,巩膜胞外基质内存在的成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor, bFGF)、转化生长因子(transforming growth factor; TGF-β)、神经生长因子(nerve growth factor; NGF)、胰岛素生长因子—I (insulin-like growth factor, IGF-1)在巩膜成纤维细胞生长发育中发挥着重要作用。但在以往FDM研究中采用的动物种属多为鸡、豚鼠等,对大鼠的研究很少。目前除了bFGF对在体外培养的大鼠巩膜成纤维细胞影响作用进行观察有报道外,TGF-β、 NGF、IGF-I对大鼠巩膜成纤维细胞的影响鲜见报道,所以有深入研究的必要。八味明目饮是辽宁中医药大学附属二院眼科经过多年临床实践总结出的经验方,主方有生地、黄芪、当归、山萸肉、丹参、附子、肉桂、五味子。它在对PM的临床治疗中取得很好的疗效,但其作用机制尚不明了。目的：本研究拟通过动物体内实验和大鼠巩膜成纤维细胞的体外培养两种方法,观察形觉剥夺后大鼠巩膜组织bFGF、TGF-β、NGF、IGF-I四种细胞GF表达变化情况和不同浓度的四种GF对体外培养大鼠成纤维细胞增值作用,探索大鼠巩膜成纤维细胞在FDM形成过程中的作用。观察八味明目饮对大鼠巩膜成纤维细胞的作用,探讨其疗效的作用机制,为临床进一步应用奠定基础。材料与方法：选用21日龄SD大鼠135只,雌雄不拘。将135只SD大鼠随机分为9组,每组15只。分别是：A1组为模型8周组；A2组为空白8周组；B1组为模型6周组；B2组为空白6周组；C1组为模型4周组；C2组为空白4周组；D1组为模型1周组；D2组为空白1周组；E组为八味明目饮组。将模型A1、B1、C1、D1、E五组大鼠于实验开始同时进行右眼眼睑缝合手术,令其形觉被剥夺。E组大鼠于术后次日开始进行中药八味明目饮汤剂灌胃治疗。各组大鼠形觉剥夺时间分别为A1和E组：8周,B1组：6周,C1组：4周,D1组：1周。各空白对照组眼部不做任何处理。各模型组及其对照组在相应时间点处死大鼠,用游标卡尺测量右侧眼球眼轴长度,并采取SP免疫组织化学法和RT-PCR法检测右侧眼球巩膜组织中bFGF、TGF-β、NGF、IGF-Ⅰ蛋白的表达水平。通过给予大鼠经口灌胃的方式制备含药血清,连续灌胃10天,于末次给药后1小时,采取动脉血,分离血清备用。采取体外培养的方法,培养大鼠巩膜成纤维细胞,应用不同浓度的bFGF、TGF-β、NGF、IGF-Ⅰ以及中药八味明目饮含药血清后,采用MTT法测定各组细胞的增殖活性,采用流式细胞术测定各组巩膜成纤维细胞的细胞周期。结果：1.模型1周组大鼠眼轴长度未出现明显变化,而4周以后,与空白对照组比较,眼轴长度显著增加。中药组与模型8、6周组比较眼轴短。2.在本实验研究范围内免疫组织化学实验结果表明,bFGF、TGF-β、NGF、IGF-Ⅰ蛋白的表达水平随眼睑缝合时间的延长而递减,而中药治疗组bFGF、TGF-β、NGF、IGF-Ⅰ的表达水平显著高于模型8周组。3.在本实验研究范围内RT-PCR实验结果显示,bFGF、TGF-β、NGF、IGF-Ⅰ mRNA的表达水平随眼睑缝合时间的延长而递减,而中药治疗组bFGF、TGF-β、NGF、IGF-Ⅰ mRNA的表达水平显著高于模型8周组。4.MTT检测结果表明,不同浓度四种GF刺激组的细胞增殖活性均显著高于空白健康血清对照组,有统计学意义(p<0.05)。5.流式细胞术检测结果表明,与空白组比较,各浓度b-FGF、TGF-β、NGF刺激后,处于G1期细胞显著减少(p<0.05),而G2、M期细胞显著增多(p<0.05)。6.流式细胞术检测结果表明,IGF-Ⅰ各浓度刺激后,处于G1期细胞显著减少(p<0.05),而S期细胞显著增多(p<0.05)。7.MTT检测结果表明,10%、20%含药血清组细胞增殖活性均显著高于空白对照组,(p<0.05)。8.与空白组比较,不同浓度含药血清刺激后的各组细胞处于G1期的细胞数量显著减少(p<0.05),处于S期的细胞数量显著增多(p<0.05)。结论：1.大鼠的形觉剥夺可造成巩膜组织中bFGF、TGF-β、NGF、IGF-I蛋白表达水平下降、眼轴增长,并随时间延长,水平逐渐降低。2.八味明目饮可有效控制形觉剥夺性近视模型大鼠眼轴的进行性增长,可能是该方能够有效上调bFGF、TGF-β、NGF、IGF-I在巩膜组织中的表达。3. bFGF、TGF-β、NGF能够促进大鼠巩膜成纤维细胞的增殖,并呈量效关系,驱动细胞进入在G2、M期；胰岛素样生长因子能够促进大鼠巩膜成纤维细胞的增殖,并呈量效关系,驱动细胞进入S期。4.八味明目饮含药血清能够促进大鼠巩膜成纤维细胞的增殖,通过驱动G1、G2、M和S期,进而具有促进DNA和蛋白质的合成而起作用。