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目的:寻找人肝癌细胞N-ras基因的RNA干涉有效靶点;建立装载靶向N-RAS基因干扰RNA质粒表达载体;利用RNA干扰技术抑制人肝癌细胞Bel-7402细胞株N-ras基因的表达,达到抑制人肝癌细胞细胞增殖、促进其凋亡的目的,为肿瘤基因治疗奠定基础并开拓新思路。方法:利用计算机网络资源及Oligo6.0、Blast Research等生物学软件在N-RAS基因编码区寻找RNAi有效靶点;以体内转录的方法构建Psilencer1.0-U6-siRNA-N-ras质粒;应用真核细胞转染技术转染人肝癌细胞Bel-7402细胞株,以转染带有不相关shRNA结构的载体的Bel-7402细胞为对照排除非特异性抑制作用;通过RT-PCR检测N-ras基因mRNA水平的表达;Western-blot检测N-ras基因蛋白水平的表达;MTT法检测转染后细胞增殖受抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:成功找到RNA干涉的有效序列1个;酶切法证明构建Psilencer1.0-U6-siRNA-N-ras质粒成功;RT-PCR和Western-blot分析表明:Psilencer1.0-U6-siRNA-N-ras-2在mRNA水平和蛋白水平特异性抑制了N-ras基因的表达;MTT结果显示:Psilencerl.0-U6-N-ras-2转染的肝癌细胞与其他三组比较细胞增殖明显受抑制;流式细胞仪证实转染Psilencerl.0-U6-N-ras-2能诱导肝癌细胞凋亡。结论:RNA干涉是抑制基因表达的有效策略;脂质体介导法可以有效转染Bel-7402细胞,是进行肝癌基因治疗的有效转染方法;Bel-7402细胞是N-ras高表达细胞株;N-ras-2序列(AAGACCAGACAGGGTGTTGAA)是抑制人肝癌细胞株Bel-7402的N-ras基因表达的RNA干涉有效靶点,而N-ras-1(GTGCCATGAGAGACCAATA)序列则不是;利用脂质体介导针对N-ras的短发夹结构RNA可以有效地抑制肝癌细胞中N-ras的表达及肝癌细胞增殖,诱导其凋亡。