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第一部分 常氧和缺氧状态加热和化疗药物作用下细胞损伤观察一、常氧状态加热和化疗药物作用下细胞损伤观察目的：观察常氧状态下加热和化疗药物细胞存活率情况，检测热休克蛋白HSP-70在热应激和化疗药物作用下的表达，以及热应激下HSP-70表达的持续时间。材料和方法：对人肝癌HCCLM3细胞、兔VX2细胞、人脐静脉内皮细胞分别采用MTT法，在37、39、41、43℃不同温度下分别加热30分钟，37℃ 5％CO2培养箱培养24小时后，检测OD值。在同等温度处理条件下，分别加入终浓度50mg/ml的MMC和2％的碘化油（Lipiodol），检测OD值。采用Western blot方法，检测人肝癌HCCLM3细胞在37、39、41、43度水浴半小时后，37℃ 5％CO2条件下培养2小时后HSP-70的表达。检测人肝癌HCCLM3细胞在加热41℃30分钟后，HSP-70蛋白随时间变化情况，检测1、2、4、6、8、12小时蛋白表达。结果：对人肝癌HCCLM3细胞、兔VX2细胞、人脐静脉内皮细胞随温度升高，反映细胞存活率的OD值降低。人脐静脉内皮细胞相对人肝癌HCCLM3细胞、兔VX2细胞OD值较低。人肝癌HCCLM3细胞在37、39、41、43℃水浴半小时后，37℃ 5％CO2条件下培养2小时后，加热39、41、43℃均有HSP-70均有表达。人肝癌HCCLM3细胞在加热41℃30分钟后， HSP-70蛋白在1、2、4、6小时表达，12小时后未能检测到表达。结论：人肝癌HCCLM3细胞、兔VX2肿瘤细胞、人脐静脉内皮细胞热损伤随温度的升高而加重。热应激作用下，Western Blot检测到HCCLM3细胞热休克蛋白HSP－70的表达，并可持续6小时以上，推测HSP-70在常氧状态下热应激导致细胞损伤和凋亡过程中可能起重要作用。关键词：常氧；细胞；热应激；MTT；OD值；Western blot；HSP-70二、缺氧状态下加热和化疗药物细胞存活率和热休克蛋白表达目的：观察缺氧状态下加热和化疗药物细胞存活率情况，检测热休克蛋白HSP-70在热应激和化疗药物作用下的表达，以及热应激下HSP-70表达的持续时间。<WP=6>材料和方法：对人肝癌HCCLM3细胞采用MTT法，在37、39、41、43℃不同温度下分别加热30分钟，37℃ 95％N25%CO2培养24小时，检测OD值。在同等温度处理条件下，分别加入终浓度50mg/ml的MMC和2％的碘化油（Lipiodol），检测OD值。采用Western blot方法，检测人肝癌HCCLM3细胞在无血清的DMEM培养液中37、39、41、43度水浴半小时后，37℃ 95％N25%CO2培养2小时后HSP-70的表达。再检测人肝癌HCCLM3细胞在加热41℃30分钟后，37℃ 95％N25%CO2培养，HSP-70蛋白随时间变化情况，检测1、2、4、6、8、12小时蛋白表达。结果：缺氧条件下，人肝癌HCCLM3细胞随温度升高，反映细胞存活率的OD值降低，较常氧条件下更低。人肝癌HCCLM3细胞在无血清的DMEM培养液中37、39、41、43度水浴半小时后，37℃ 95％N25%CO2培养2小时后均有HSP-70的表达。人肝癌HCCLM3细胞在加热41℃30分钟后， 37℃ 5％CO2条件下培养1、2、4、6、8小时表达，12小时后未能检测到表达。结论：缺氧条件下人肝癌HCCLM3细胞热损伤随温度的升高而加重。Western Blot检测热休克蛋白HSP－70，发现缺氧亦可诱导细胞表达热休克蛋白HSP-70，加热后序贯缺氧HSP-70蛋白含量增高持续时间较单纯受热更长。提示在细胞水平加热结合缺氧较单纯加热对细胞热损伤更明显，推测HSP-70在缺氧状态下热应激导致细胞损伤和凋亡过程中可能起重要作用。关键词：缺氧;细胞;热应激;MTT;OD值;Western blot;HSP-70