苏云金芽孢杆菌cry基因型的鉴定

来源 :河北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Lv619
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
为进一步发掘我国的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)的菌株资源和新型的cry毒素基因资源,本研究从几种不同生境中采集土样分离出800株野生菌株,从中得出苏云金芽孢杆菌的分布具有一定的规律性:植被覆盖率越高,原始植被保存越完好的地区,Bt出菌率越高;土壤表面腐质层越厚,土壤所含腐殖质越丰富,Bt含量越多。800株野生菌株的伴孢晶体形态大多为圆形,还有方形、菱形,个别菌株同时含有2种或3种晶体,这说明我国菌株资源丰富,并具备多样性的特点。本研究利用PCR-RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP)鉴定体系来鉴定Bt分离株的cry基因类型。根据基因保守区设计通用引物进行PCR扩增,扩增产物进行单酶切或双酶切,依其限制性片断长度多态性(RFLP)图谱分析其基因类型。其结果显示:含cry1类基因型的有107株;含cry2类基因型的有202株;含cry3类基因型的有15株;含cry-8类基因型的有361株;含cry7类的1株;含cry9类的57株;含cry40类的1.株;含cry6类的2株;含cry11类基因的有2株;没鉴定到基因类型的菌株58株,可能含有cry1-35,cry40以外的基因型或新的cry基因型。首次发现3株同时含有cry1类、cry2类、cry8类和cry9类的基因组合,它们的晶体形状都为菱形,都编码130kDa和90kDa的蛋白;这三株菌是否具有广泛的杀虫谱还有待今后进一步探究。菌株FSQ87的cry40基因得到1386bp长度的序列,经克隆、测序及序列比对,与模式基因cry40Ba保持88%的同源相似性;这一基因很可能是新的第三等级的模式基因,有待于该基因全长序列的测定。取含cry8类的Bt菌株,以铜绿丽金龟幼虫为试虫,进行杀虫活性测定,结果显示:校正死亡率为100%的菌株有13株。其中,有12株均含有编码毒杀铜绿丽金龟幼虫毒素蛋白的cry8Ca基因,这些菌株的伴孢晶体都含有分子量为130kDa的蛋白、晶体形态都为圆形,建议对这部分菌株继续克隆其全长基因,确定是否为第四等级的新基因,以便进一步进行多功能工程菌及转基因抗虫作物的研究和开发。而FTL53没有鉴定到已有的基因类型,有可能是新的cry基因型。取没有检测到cry基因型的Bt菌株,以小菜蛾为试虫,进行杀虫活性测定,结果表明校正死亡率为100%的菌株有3株,分别是:L12、yn5和HF4。这3株菌推测其可能含有cry1-35,cry40以外的基因型或者是新的编码杀灭小菜蛾毒素蛋白的基因。
其他文献
泡沫病毒(Fomay virus,FV)属在分类上归于反转录病毒科泡沫病毒亚科,它们能在多种动物中产生持续性感染。但至今没有其引发疾病的报道。该属病毒具有复杂的基因组结构和独特的
Toll-like受体识别病原相关的分子模式,主要在调控天然免疫中发挥作用。在肝脏中Toll-like受体激活炎症信号通路如NF-κB,JNK,p38和干扰素信号通路,并且起着调控抗病毒、抗细菌应
混凝土的特性决定了裂缝在混凝土结构物中的存在的必然性,如何控制在混凝土结构物的设计年限里,不出现对结构物产生危害的裂缝是各国工程技术人员研究的方向。在混凝土结构物施