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目的:观察SEMA3B对老年骨质疏松患者(SOP)人骨髓间充质干细胞(h-BMMSC)的成骨分化作用。方法:对股骨近端骨折的老年病人做QCT骨密度检测,依据结果将其分为两组(骨质疏松组和非骨质疏松组)。两组间各选10人行骨髓取样,采用全骨髓贴壁法做细胞培养,利用有限稀释法进行细胞提纯,使用流式细胞技术对获取的h-BMMSC进行细胞表观鉴定。采用CCK-8法检测两组h-BMMSC的增殖能力。利用碱性磷酸酶和茜素红染色观察两组h-BMMSC的成骨分化活性。进一步引入RT-PCR技术,检测两组h-BMMSC与SEMA3B表达水平的关系,并检测两组在成骨分化过程中(第3、7、10和14天)SEMA3B表达水平的变化情况。然后,运用慢病毒转染技术将SEMA3B过表达,观察h-BMMSC的增殖和成骨分化的情况。进一步细胞体外实验,分为空白组(h-BMMSC组)、对照组(h-BMMSC+慢病毒感染组)和实验组(h-BMMSC+慢病毒转染组),提取三组中SEMA3B m RNA,运用RT-PCR检测SEMA3B在h-BMMSC的表达水平,检测SEMA3B的转染效率。而后进行细胞培养,运用CCK-8法检测三组间h-BMMSC的增殖能力;使用碱性磷酸酶和茜素红染色法观察组间h-BMMSC的成骨分化活性;采用RT-PCR技术检测三组间成骨基因(Runx2、ALP、OCN)的表达水平。结果:(1)人骨髓组织经全骨髓贴壁细胞培养、有限稀释纯化后,可获得较同质化的原代h-BMMSC。流式细胞鉴定结果:超过90%获得的细胞对CD29、CD90和CD105表达阳性、而对CD34和CD45表达阴性。此结果与h-BMMSC细胞表观特性一致。(2)CCK-8实验结果:在前5天,骨质疏松组和非骨质疏松组h-BMMSC的增殖能力无差异;在第5天以后非骨质疏松组h-BMMSC增殖能力显著提高。(3)碱性磷酸酶试验结果:非骨质疏松组h-BMMSC在成骨分化过程中碱性磷酸酶的活性显著高于骨质疏松组。茜素红实验结果:h-BMMSC在成骨分化第21天时,非骨质疏松组的矿化能力强于骨质疏松组;非骨质疏松组的钙结节数量显著高于骨质疏松组。(4)RT-PCR检测SEMA3B的表达水平,非骨质疏松组h-BMMSC中SEMA3B的表达水平为骨质疏松组的1.27倍。骨质疏松组和非骨质疏松组h-BMMSC中SEMA3B的表达水平均随着成骨分化的时间的增加而增加;非骨质疏松组h-BMMSC在第3、7、10和14天SEMA3B的表达水平均高于骨质疏松组。(5)转染后运用RT-PCR检测SEMA3B在h-BMMSC的转染率,结果:空白组和对照组无差异,相对于对照组,实验组SEMA3B表达水平上升明显。(6)转染后CCK-8实验结果:在三组h-BMMSC细胞增殖中,空白组和对照组无差异;在前5天,对照组和实验组h-BMMSC的增殖能力无差异;在第5天以后实验组h-BMMSC增殖能力较对照组显著提高。(7)转染后碱性磷酸酶结果:在三组h-BMMSC细胞成骨分化过程中,空白组和对照组无差异;实验组h-BMMSC碱性磷酸酶活性显著高于对照组。(8)转染后茜素红实验结果:在三组h-BMMSC细胞成骨分化第21天时,空白组和对照组无差异;实验组h-BMMSC的矿化能力及钙结节数明显高于对照组。(9)转染后成骨相关基因表达结果:在三组h-BMMSC细胞成骨分化过程中,空白组和对照组无差异;与对照组相比,实验组h-BMMSC成骨标志基因的表达均升高。结论:老年性骨质疏松人群h-BMMSC的增殖能力、成骨分化活性和SEMA3B的表达均低于非骨质疏松人群。SEMA3B可明显促进老年性骨质疏松症人群h-BMMSC的细胞增殖和成骨分化。