基于高通量测序探究中药合剂对红色毛癣菌和须癣毛癣菌的抑菌作用

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目的通过研究中草药对红色毛癣菌和须癣毛癣菌的生长抑制作用,制备中药合剂,探讨红色毛癣菌和须癣毛癣菌中药合剂作用后的抑菌机制。通过对照组与实验组的比较,阐明药物的基因作用位点和代谢通路等,为中药合剂治疗皮肤浅部真菌病提供了理论基础和科学依据。方法(1)筛选目标中药:适应倍比稀释的方法确定每种中药水提物对红色毛癣菌和须癣毛癣菌的最低抑菌浓度;用牛津杯实验观察抑菌圈大小,测定中药的药效。(2)目标中药的联合作用:用微量棋盘稀释的方法研究两中药之间的相互作用。(3)中药合剂的合理配置:采用均匀设计实验找出对红色、须癣毛癣菌有强抑菌作用的中药配方。(4)中药合剂的抑菌作用机制研究:高通量测序对用药后的红色毛癣菌和须癣毛癣菌进行测序,从生物学信息分析、差异表达基因、GO富集分析、KEGG途径富集等方面分析了中药治疗红色毛癣菌和须癣毛癣菌的基因作用位点和作用机制。结果知母:黄连:土槿皮:地肤子:决明子:黄柏=9:7:5:1:8:2的中药合剂对红色毛癣菌有强抑菌效果,主要通过上调红色毛癣菌的基因短链脱氢酶、谷胱甘肽转移酶、疏水蛋白、肽酶、外排泵、ABC转运蛋白等基因含量;和下调红色毛癣菌的甲醛脱氢酶、乙二醛酶、胶原三螺旋、β-内酰胺酶、外排泵mlc E、pat C、bik6等的基因位点,来加速红色毛癣菌的代谢分解作用,进而抑制其生长的。其基因主要集中在分子功能、真菌遗传物质的破坏、细胞膜的破坏以及对代谢通路(如:苯丙氨酸代谢、谷胱甘肽新陈代谢、β-丙氨酸代谢、乙醛酸代谢和二羧酸代谢等)的影响。知母:黄连:地肤子=5:3:1对须癣毛癣菌有强抑菌效果,主要通过上调枯草杆菌蛋白酶SUB7、水通道蛋白、疏水剂、谷胱甘肽转移酶、β-内酰胺酶、防御素等基因含量;和下调硫氧还蛋白还原酶、肽酶S41、S8、N-乙酰氨基葡萄糖、细胞色素P450、外排泵TNC、L2等的基因位点,来加速须癣毛癣菌的裂解。这些基因主要也富集于分子功能、破坏细胞膜、影响蛋白质的合成、以及影响体内物质代谢来抑制真菌的生长。结论中药合剂可以降低单味中药的用量并且起到更好的抗皮肤癣菌效果。对于皮肤癣菌而言,复方中药合剂比单味中药的抗皮肤癣菌效果更强,因此将中药进行合理配伍后,不仅可以提高中药的利用率,而且可以促进资源优化配制,具有开发利用价值。知母:黄连:土槿皮:地肤子:决明子:黄柏=9:7:5:1:8:2的中药合剂对红色毛癣菌有强抑菌效果;知母:黄连:地肤子=5:3:1的中药合剂对红色毛癣菌有强抑菌效果。这两种中药合剂有望成为一种新的抗真菌药物,为下一步寻找新型抗皮肤癣菌的中药提供理论基础。
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