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目的:近年来,国内外多次出现新型腺病毒暴发感染疫情,特别是在学校、幼儿园、医院、部队,有逐年增多的趋势。我国在新型腺病毒疫苗开发方面相对滞后,突发疫情防控主要依靠消毒、呼吸道防护、药物治疗等措施。但是对于新型腺病毒在外环境中的抵抗力与消毒效果方面的直接研究尚少。为了寻找行之有效的腺病毒灭活方法,本课题选用不同种类的消毒剂对新型腺病毒灭活效果进行研究,并对腺病毒55型灭活效果的影响因素和在自然状况下的衰亡规律进行探讨,为新型腺病毒疫情处理、实验室安全操作以及预防日常腺病毒感染提供理论依据。内容:腺病毒55型传染能力较强,可感染呼吸系统、肝脏、消化系统化及眼结膜等多个部位,是一种分布非常广泛的DNA病毒。本课题主要从以下几个方面对新型Adv55型的灭活规律进行探讨:1、不同消毒剂对Adv55灭活效果的比较。2、腺病毒55型灭活效果影响因素的研究。3、Adv55和PV-Ⅰ抗力的比较。4、自然情况下腺病毒55型衰亡规律的研究。方法:1、不同消毒剂对Adv55灭活效果的比较依据中华人民共和国卫生部发布的《消毒技术规范》(2002年版)中所制定的病毒灭活方法进行研究,分别选用高效、中效和低效三种不同作用水平的常见消毒剂,设定适当的浓度和时间探索其对Adv55灭活效果的差别。2、Adv55灭活效果影响因素的研究(1)有机物影响试验试验时取准备好的滴度值为106-107TCID50病毒悬液分别与含量30g/L、3g/L、0g/L的牛血清白蛋白(BSA)溶液作对倍稀释,配制成含高浓度、低浓度、不含有机物的三种浓度的病毒悬液。根据病毒灭活的试验方法进行,作用至一定时间,然后进行相应的稀释和接种,接种完成后将细胞培养板放于细胞培养箱培养3-5天,每日观察细胞病变情况,计算Adv55滴度和灭活对数值。(2)温度影响试验取准备好的滴度值为106-107tcid50病毒悬液与含量为30g/l的牛血清白蛋白溶液进行对倍稀释,然后将次氯酸钠消毒液配制成所需要浓度。试验分别在4℃、10℃、20℃、30℃、40℃恒温条件下进行,依据病毒灭活试验方法进行。将细胞培养板置于细胞培养箱养3-5天,每日观察细胞病变情况,计算病毒滴度和灭活对数值。3、adv55与pv-Ⅰ抗力的比较依照中华人民共和国卫生部发布的《消毒技术规范》(2002年版)中的试验规定进行相应研究,将以次氯酸钠为代表,在相同条件下比较pv-Ⅰ和adv55的抗力。4、adv55在自然情况下的衰亡规律吸取20ul的adv55悬液于玻璃载玻片上,将玻璃载玻片放于无菌培养皿中,分别置于4℃冰箱、生物安全柜、37℃恒温箱中,在以上不同环境条件下培养到设定时间后取出载玻片,用细胞感染法测定并计算adv55的滴度。结果:1、不同消毒剂对adv55灭活效果的比较含有效氯400mg/l的次氯酸钠溶液、作用时间为20分钟,含600mg/l的过氧乙酸溶液、作用时间为20分钟,含1000mg/l有效碘的碘伏溶液、作用时间为40分钟,以上三种消毒剂对adv55的灭活对数均>4.00。以上三种条件下,三种消毒剂均能对病毒达到灭活效果,而低效消毒剂则达不到杀灭病毒的效果。2、adv55灭活效果影响因素研究(1)有机物影响试验含400mg/l有效氯的次氯酸钠消毒剂对adv55的灭活效果随着病毒液中bsa含量的增大而降低。用含有效氯400mg/l的次氯酸钠作用15分钟,高浓度bsa(30g/l)悬液中adv55的灭活对数值为3.23,低浓度bsa(3g/l)悬液中adv55的灭活对数值为4.67,对不含bsa悬液中adv55灭活对数值为5.98。(2)温度影响试验含400mg/l次氯酸钠消毒剂的体系中,在一定温度范围内,灭活adv55的效果随温度的增加而增强。在作用时间为15分钟,温度为4℃、10℃、20℃时,灭活对数均<4.00,温度上升为30℃时,灭活对数值上升为4.80,而在温度为40℃时,灭活对数值可以达到6.13。3、adv55和pv-Ⅰ抗力的比较含600mg/L有效氯的次氯酸钠溶液,作用10分钟,Adv55和PV-Ⅰ的灭活对数值均大于4.00,而在有效氯含量为600mg/L的次氯酸钠消毒剂作用20分钟,Adv55的灭活对数值为5.00,而Adv55的灭活对数值为6.01。4、Adv55在自然情况下的衰亡规律这项研究模拟了在自然情况下Adv55的衰亡状况,Adv55具有较强的稳定性,在4℃条件下可以生存1周以上,在25℃情况下也可以存活将近4天,随着暴露时间的延长和温度的升高,Adv55的衰亡速度大大加快。结论:本研究以Adv55为近年来我国新发呼吸道传染病病原体的代表,探讨了常见消毒剂对Adv55灭活规律、Adv55灭活效果的影响因素、Adv55的自然衰亡规律。高效消毒剂和某些中效消毒剂在适当的浓度和作用时间下对Adv55有较好的灭活效果,低效消毒剂无效。Adv55的灭活效果受消毒剂作用浓度和时间、病毒悬液中有机物浓度、温度等多个因素的影响。Adv55对消毒的抵抗力稍低于PV。Adv55型在冬季低温(4℃)条件下,可以存活1周以上,温度升高有利于病毒的衰亡。因此在处理Adv55疫情时应综合考虑多方面的因素,这样才能取得理想的灭活效果。