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阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）为革兰氏阴性菌，是一种普遍存在于大自然中的条件致病菌。阪崎肠杆菌不仅能够存在于受污染的食品和食品厂中，而且在包括家居在内的几乎所有环境中都能分离到。阪崎肠杆菌感染可以引起婴幼儿尤其是新生儿患病，产生比较严重的疾病如脑膜炎、菌血症及坏死性小肠结肠炎等，甚至会引起严重的后遗症或者死亡。目前发现，只有婴幼儿奶粉与疾病的暴发相关。因此，建立一种在婴幼儿奶粉中高效灵敏的检测阪崎肠杆菌的方法是至关重要的。实时荧光环介导等温扩增技术（RF-LAMP）是以环介导等温扩增技术（LAMP）为理论依据，将荧光染料与LAMP技术相结合，利用恒温扩增实时荧光检测系统（DEAOU ARTⅡ）通过荧光信号的累积监测RF-LAMP反应的进程，对模板进行实时分析，直观分析目的基因的扩增结果，自动显示检测结果的阴阳性。根据阪崎肠杆菌在GenBank中16S rRNA基因(HQ880288.1)，利用在线软件（http://www.primerexplorer.jp/e/）进行引物设计，对Mg2+浓度、dNTPs浓度、反应温度等扩增条件进行优化，确定25μL的RF-LAMP反应体系：10μM FIP和BIP各3.5μL，10μMF3和B3各0.5μL，50mMMgSO41μL，2.5mmol/LdNTPs2μL，10×BstDNA聚合酶缓冲液，8000U/ml的BstDNA聚合酶0.8μL，2μLDNA模板，0.5μLSYBRGreenI（1：100），其余用灭菌双蒸水补足。实时荧光LAMP反应程序：扫描频率为30s或60s一次，反应温度为63℃，反应时间90min（通过观察反应情况随时停止）。通过限制性内切酶ACCIII酶切扩增产物，测得酶切片段与理论预期值相符，验证了方法的正确性。本研究对3株阪崎肠杆菌菌株和20株其他食源性致病菌菌株进行特异性试验，试验结果表明只有3株阪崎肠杆菌菌株检测结果为阳性，其他20株食源性致病菌菌株均为阴性结果，表明本研究具有较高的特异性。比较实时荧光环介导等温扩增技术与PCR技术检测阪崎肠杆菌的灵敏度和人工污染检出限，试验结果发现实时荧光环介导等温扩增技术检测阪崎肠杆菌纯培养物的灵敏度和人工污染的婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌的检出限都达到47CFU/mL，而PCR检测方法仅为4.7×103CFU/mL。RF-LAMP技术是常规PCR技术的100倍，并且大大缩短了检测时间。研究表明，本研究所建立的实时荧光环介导等温扩增技术检测婴幼儿奶粉中阪崎肠杆菌的方法具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、成本低等特点，并且该检测方法操作简单，不需要繁琐的电泳过程，快速省时，为快速检测食源性致病菌构建了一个技术平台，更利于基层检验检疫机构的应用。