大豆异黄酮对HT-29细胞间质转化的影响

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亚洲国家在乳腺癌、前列腺癌及结肠癌等恶性肿瘤的发病率和死亡率方面普遍低于美国等发达国家,这种现象被认为与亚洲人喜欢摄取更多的大豆食品有关。许多研究发现,大豆中尤其是大豆异黄酮,具有显著的癌症抑制作用,但其机理也一直是研究热点。本文主要通过大豆异黄酮——染料木素和大豆苷元,作用结肠癌HT-29细胞,探索大豆异黄酮在结肠癌增殖和间质转化过程中的作用及分子调控机制。MTT试验结果表明染料木素和大豆苷元对HT-29细胞具有显著的抑制功效,并呈现浓度依赖关系,实验得出最佳作用浓度约为200 μmol/L,并且作用48h的效果最佳,染料木素作用效果优于大豆苷元。DAPI染色、AO/EB双染等荧光染色观察结果显示:经染料木素、大豆苷元及肿瘤坏死因子α作用的HT-29细胞呈现明显的凋亡形态上的改变。通过Transwell小室侵袭实验发现:经过染料木素作用后,HT-29细胞侵袭数量减少,肿瘤坏死因子α作用后细胞侵袭数量增多。与侵袭相关基因的RT-PCR实验结果表明,染料木素能抑制HT-29细胞侵袭,肿瘤坏死因子α促进细胞侵袭。钙黏蛋白E-cadherin的免疫蛋白印迹实验及免疫荧光染色结果显示,染料木素可通过增加上皮表征蛋白E-cadherin表达,减少间质表征蛋白N-cadherin的表达,来抑制上皮间质转化的发生,从而抑制结肠癌细胞侵袭与转移,减少癌细胞转移的危害。免疫印迹实验结果表明:染料木素作用于HT-29细胞后,抑制Notchl的表达,使得PI3K表达下降,降低NF-κBp65的表达,使磷酸化NF-κBp65表达下降,从而抑制抗凋亡蛋白Bcl-2发挥作用,Bax/Bcl-2比例上升,进而引起Caspase级联反应,最终诱导HT-29细胞发生凋亡。
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