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第一部分：肿瘤细胞exosome的分离和鉴定 目的：检测舌鳞癌细胞系Tca-8113在体外培养时分泌exosome的能力，观察Tca-8113细胞形成exosome的过程，从培养上清液中分离exosome并测量其大小、观察其形态、分析其组成成分等。 方法：培养Tca-8113细胞，用Millipore浓缩离心管分离纯化培养上清液中的exosome，透射电镜观察Tca-8113细胞多泡体(multivesicular body，MVB)和exosome的超微结构、形成过程；用冻溶法制备肿瘤冻溶抗原(frozen tumor antigen，FTA)；用ELISA法测定exosome中MHC Ⅰ类分子的含量；用Western blotting定性分析exosome和FTA中的MHC Ⅰ和Hsc70。 结果：经透射电镜观察，Tca-8113细胞内有大量MVB。出现在MVB腔内的小囊泡由MVB的膜向内出芽形成，MVB膜胞浆面成了小囊泡的内面，小囊泡内包裹的主要是细胞浆。MVB膜与细胞质膜融合后，小囊泡被释放到细胞外的间质中。从Tca-8113细胞培养上清液中分离得到的exosome，形状为球形、椭球形或哑铃形，直径为30～90nm。用Western blotting分析exosome和FTA，其MHC Ⅰ和Hsc70均为阳性；ELISA法一抗用鼠抗人MHC Ⅰ(HLA-A、HLA-B、HLA-C)单抗测得Tca-8113细胞每ml培养上清液中含(7.35±1.47)×10~9个MHC Ⅰ类分子，相当于每个Tca-8113细胞每天向胞外分泌(0.92±0.18)×10~4个exosome形式的MHC Ⅰ类分子。 结论：肿瘤细胞Tca-8113在体外培养时可以分泌exosome；exosome中