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目的:探讨RIPK4(受体相互作用蛋白激酶4)蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其与细胞周期蛋白之间关系,揭示RIPK4可能与诱导肺癌细胞增殖的关系。研究方法:一、材料,111例非小细胞肺癌组织蜡块来自于2013-2015年间中国医科大学附属第一医院手术切除的存档蜡块,患者术前均未接受过任何化学或放射治疗。标本均经10%福尔马林液固定后,进行常规的石蜡包埋。二、主要试剂和来源,兔抗人RIPK4多克隆抗体购买自Santa Cruz公司;SP免疫组化试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司;RIPK4质粒及干扰片段购自Origene公司。三、方法,应用免疫组织化学染色(SP法)检测111例非小细胞肺癌组织中RIPK4的表达及定位。细胞培养,本研究采用人肺癌细胞系A549,H1299,HBE,SK,292,H661和H460等,在设置为37℃、5%C02饱和湿度的孵箱中,用含10%新鲜小牛血清的DMEM或RPMI1640培养基进行细胞培养。并运用质粒转染技术使肺癌细胞H1299中RIPK4过表达,采用Western blot方法观察细胞周期蛋白等多种蛋白的变化情况。同理,运用siRNA干扰技术下调肺癌细胞H1299中RIPK4的表达,观察周期蛋白的变化情况,分析RIPK4表达与细胞增殖的关系。用实时定量PCR检测细胞周期蛋白分子水平的表达。此外,用MTS技术和细胞集落实验检测功能学变化,进一步分析与验证RIPK4表达与肿瘤细胞增殖的关系。四、统计学分析,运用SPSS(PASW)l7.0统计学分析软件,对RIPK4表达与临床病理因素的关系进行分析,由t检验完成,以a=0.05为水准,P<0.05为有统计学意义。结果:1.用免疫组织化学实验检测111例非小细胞肺癌组织中RIPK4蛋白的表达情况,并证明其定位在细胞浆中。2.Western blot方法检测RIPK4在A549,H1299,HBE,SK,292,H661和H460等肺癌细胞系中的表达情况,选择表达中等的H1299细胞系进行实验。3.在H1299细胞系中过表达RIPK4,CyclinD1等细胞周期蛋白同样表达增加;同理在H1299细胞系中干扰掉RIPK4则有相反的表现。4.体外功能学实验MTS显示,转染RIPK4质粒后,肿瘤细胞增殖能力增强高于对照组。细胞集落实验也表明,与对照组相比转染RIPK4质粒组,肿瘤细胞增殖能力强于对照组;而RIPK4干扰组与对照组相比,肺癌细胞的增殖能力降低。结论:1.RIPK4在肺癌组织中表达并定位在细胞浆中,并且在腺癌中高表达。2.RIPK4能影响细胞周期蛋白的表达并与其成正相关,RIPK4的过表达可能促进肿瘤细胞的增殖。