低分子量蛹虫草多糖的制备及降血糖活性研究

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蛹虫草子实体的营养物质丰富,生物活性广泛,应用价值极高,虫草多糖作为主要活性成分备受关注。然而多年来人们专注于研究虫草多糖丰富的生物活性,却忽略了虫草多糖本身的分子量大,水溶性差等特点,这些特点会影响多糖在生物体内利用率和生物活性。因此降低多糖的分子量是提高多糖的水溶性,增大多糖生物活性的必要手段。本文通过化学降解的方法制备低分子量蛹虫草多糖,研究低分子量多糖与降血糖活性的关系。主要研究方法和结果如下:通过单因素实验和重复性实验优化体外筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂反应体系,确定α-葡萄糖苷酶反应体系的最佳反应条件为:酶活力1 U/mL,酶液添加量为400 μL,底物浓度15 mmol/L,反应时间40 min,精密度实验RSD为0.3%,重复性实验RSD为 0.5%。以蛹虫草子实体为原料,通过水提醇沉、Sevag法除蛋白,提取蛹虫草粗多糖。苯酚硫酸法和DNS法测得蛹虫草粗多糖糖含量为37.9%,粗多糖经Sephadex G-100纯化处理后得到蛹虫草子实体纯多糖,经测定蛹虫草纯多糖糖含量为83.1%,利用高效凝胶色谱(HPGPC)法分析得到蛹虫草子实体多糖的重均分子量约为650 KDa。选择盐酸降解蛹虫草子实体多糖,并以α-葡萄糖苷酶抑制率做为指标,制备α-葡萄糖苷酶抑制率最高的低分子量多糖。以酸浓度,底物浓度,降解时间,降解温度作为单因素考察条件,经正交试验分析得到:当酸浓度为0.125 mo1/L,底物浓度为15 mg/mL,降解时间0.5 h,降解温度75℃时得到的低分子量多糖的酶抑制率最高,即此时得到的低分子量多糖的体外降血糖活性最高。经试验对比,当底物浓度范围在0.25~1.75 mg/mL时,低分子量多糖体外α-葡萄糖苷酶抑制率高于子实体多糖和阿卡波糖。通过Sephadex G-75对酶抑制率最高的低分子量多糖进行分离纯化,HPGPC分析纯化后的低分子量多糖为均一组分,其重均分子量约为28 KDa。通过比旋光度测定、红外光谱、单糖组成分析、高碘酸氧化和Smith降解分析、核磁共振分析、刚果红试验的方法对纯化的低分子量多糖进行结构分析,结果显示:低分子量多糖比旋光度为+25°。由鼠李糖、木糖、葡萄糖这三种单糖通过糖苷键链接而成,其摩尔比为1:2.19:6.73,各单糖残基的链接方式有1→6、1→2、1→4类型的糖苷键。采用高血糖小鼠模型验证低分子量多糖在体内的降血糖活性。结果显示:低分子量多糖对小鼠空腹血糖值有极显著降低(p<0.01)的作用,且能有效缓解由高血糖引发的多饮多食现象。
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