背景：子宫内膜异位症(endometriosis，EM)，简称内异症，是一种常见且难治的妇产科疾病，发病率约占生育年龄妇女的15％，近年来有明显上升趋势。内异症所引起的痛经、下腹痛及性交痛等，严重地影响了妇女的健康和生活质量，也是不孕症的主要病因之一。其病变广泛，形态多样，且有浸润性生长、广泛种植转移和易复发的恶性生物学行为，成为妇产科的棘手疾病之一。内异症的发病机制尚不完全清楚，目前广泛接受的是1925年Sampson提出的经血逆流子宫内膜种植学说，但内膜种植及其侵袭转移是多因素参与的复杂过程。逆流的内膜碎片经过黏附、侵袭及血管生成的过程，才能继续存活，形成内异症。期间涉及众多细胞因子、酶、生长因子等，并涉及遗传、内分泌障碍，免疫功能异常。近年来，关于内异症在位内膜本身所具有的特点及其在发病中的作用，逐渐受到人们的重视。核因子Kappa B(NF-κB)广泛存在于真核细胞中，一般状态下以同源或异源二聚体形式与其抑制蛋白IκB形成复合物，以非活性状态存在于胞浆中，在受到生理或有害因素的刺激后，依靠信号传导系统由无活性状态转变为活性状态，激活后的NF-κB从NF-κB-IκBs复合物中解离，进入细胞核，与相应的靶基因结合，启动转录。其活化过程不需要合成新的蛋白，故能及时引起细胞反应早期的功能变化，继发引起其他因子的产生和活化。NF-κB是一种普遍性的转录因子，作用于多种靶基因。其靶基因涉及细胞因子、细胞膜受体、膜黏附分子、急性期蛋白、生长因子、转录因子等的编码基因。因此，NF-κB的活性关系到一些细胞的生长分化、炎症反应、免疫应答、肿瘤生长等生物学过程。近年来，核转录因子已成为肿瘤研究的一个新热点，已发现与肝细胞癌、前列腺癌、胃癌、支气管肺泡癌、直肠癌、乳腺癌、宫颈癌、神经胶质瘤等恶性肿瘤的发生、发展、疾病分期及预后均有一定的相关性。但NF-κB在内异症中的作用研究甚少，国外有研究发现TNF-α及IL-1β通过NF-κB介导的信号途径，刺激单核细胞和T细胞选择性趋化因子(RANTES)表达增加，从而诱导内异症的发生。内异症的发生与异位内膜在异位黏附、种植、血管形成等过程有关，并涉及众多炎症性细胞因子、生长因子等，而NF-κB的异常激活可上调与这些过程有关的细胞因子，如VEGF、ICAM-1、MMP-9、Bcl-2、IL-1β、TNF-α等，故探讨NF-κB在子宫内膜异位症发病机制中的作用是本课题的研究目的。研究目的1用免疫组织化学的方法检测NF-κBp65、VEGF、ICAM-1、MMP-9和Bcl-2在内异症患者的在位及异位子宫内膜组织中的表达及NF-κB与VEGF、ICAM-1、Bcl-2和MMP-9之间的相关性来探讨NF-κB与内异症的关系。2体外培养正常子宫内膜细胞、在位及异位子宫内膜细胞，分别给予脂多糖(LPS)及LPS+二硫氨基甲酸肽吡咯烷(PDTC)进行干预，用Western Blot方法检测三组子宫内膜细胞的NF-κBp65蛋白浓度及了解LPS、LPS+PDTC对在位及异位子宫内膜细胞NF-κB蛋白浓度的影响；用ELISA方法检测三组子宫内膜细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α浓度及LPS、LPS+PDTC对三组子宫内膜细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α浓度的影响，探讨NF-κB在内异症中的发病机理。3建立SD大鼠内异症模型，用NF-κB的抑制剂NF-κB反义寡核苷酸(antisense-Oligonucleotides，ASODN)干预治疗内异症模型，观察NF-κB ASODN治疗后对大鼠成模率、异位病灶及对TNF-αmRNA的影响，进一步探讨NF-κB在内异症发病机制中的作用。方法及结果1．NF-κB在内异症中的表达收集2006年4月至2006年10月34例rAFSⅠ-Ⅳ期的内异症患者34例做为研究组，其中在位内膜32例，异位内膜34例；CIN患者30例做为对照组。采用免疫组织化学SP法分别检测NF-κ3、VEGF、ICAM-1、Bcl-2、MMP-9在30例正常子宫内膜、32例在位内膜及34例异位内膜中的表达。结果表明：(1)NF-κB、VEGF、ICAM-1、Bcl-2和MMP-9主要表达于三组子宫内膜的腺上皮细胞，在异位内膜的间质及血管内皮中亦有少量表达。在位及异位子宫内膜表达与对照组正常子宫内膜相比，差异有极显著统计学意义(P＜0.001)；(2)在位及正常子宫内膜的NF-κB表达不随月经周期的改变而改变，在位及正常子宫内膜在增生期与分泌期相比，差异无统计学意义(P＞0.05)；(3)NF-κB的表达与内异症的临床期别存在一定的相关性，在在位子宫内膜组织Ⅱ期的表达最强，Ⅱ期与Ⅳ期相比，差异有极显著统计学意义(P＜0.001)；异位子宫内膜中Ⅰ期的表达与Ⅳ期相比，差异有显著统计学意义(P＜0.01)；Ⅱ期的表达与Ⅳ期相比，差异有极显著统计学意义(P＜0.001)；(4)NF-κB与VEGF、ICAM-1、Bcl-2、MMP-9之间具有正相关性，相关系数分别是0.77、0.5、0.63及0.57(P＜0.001)。2．内异症体外模型中LPS、PDTC对三组子宫内膜细胞NF-κB蛋白浓度及对IL-1β、TNF-α浓度的影响(1)体外培养异位子宫内膜细胞、在位子宫内膜细胞及对照组正常子宫内膜细胞，分别给予LPS及LPS+PDTC干预刺激，用Western Blot方法检测三组子宫内膜细胞的NF-κB蛋白浓度，及LPS及LPS+PDTC干预后NF-κB的蛋白浓度变化。(2)用ELISA方法检测三组子宫内膜细胞培养上清液的IL-1β、TNF-α的浓度，及LPS及PDTC干预后三组子宫内膜细胞培养上清液的IL-1β、TNF-α的浓度变化。结果表明：(1)在子宫内膜细胞、在位及异位子宫内膜细胞这三组中，在位内膜细胞及异位内膜细胞的NF-κB蛋白浓度显著高于子宫内膜细胞，其差异有显著统计学意义(P＜0.01)；在位及异位子宫内膜细胞NF-κB的蛋白表达LPS组最高，显著高于对照组及LPS+PDTC组，差异有显著统计学意义(P＜0.01)，PDTC可抑制NF-κB蛋白表达。(2)在位及异位子宫内膜细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α浓度明显高于正常子宫内膜细胞，差异有显著统计学意义(P＜0.01)；在位及异位子宫内膜细胞之间比较，异位子宫内膜细胞培养上清液中的IL-1β、TNF-α浓度高于在位子宫内膜细胞，差异有显著统计学意义(P＜0.01)；在分别给予LPS、LPS+PDTC干预后，子宫内膜细胞上清液中的IL-1β、TNF-α浓度无明显变化，差异无统计学意义(P＞0.05)；而在在位及异位内膜细胞的上清液中，IL-1β、TNF-α浓度在LPS组最高，明显高于对照组及LPS+PDTC组，差异有显著统计学意义(P＜0.01)。3．建立SD大鼠内异症模型，尾静脉注射NF-κBASODN，观察NF-κB ASODN对SD大鼠内异症建模成功率、异位病灶变化。并采集异位病灶，用RT-PCR方法检测大鼠内异症模型异位内膜TNF-αmRNA的表达变化。结果显示：(1)NF-κB ASODN干预治疗后，与未干预组及对照组相比，大鼠内异症模型的成模率明显降低，差异有显著统计学意义(P＜0.01)，异位病灶的体积也明显减小，差异有显著统计学意义(P＜0.01)；且NF-κB ASODN干预治疗后，异位病灶的改变随时间的延长更显著，第8周异位病灶的体积较第4周明显缩小，差异有统计学意义(P＜0.05)；而对照组和干预组的异位病灶则随时间的延长而明显增大，差异有统计学意义(P＜0.05)。(2)NF-κB ASODN组与未干预组及对照组比较，TNF-αmRNA的表达强度显著减弱，差异有显著统计学意义(P＜0.01)；未干预组及对照组相比，TNF-αmRNA的表达强度无明显变化，差异无明显统计学意义(P＞0.05)。结论(1) NF-κB在子宫内膜异位症患者的在位及异位的内膜中有异常高表达，而在正常子宫内膜组织中微弱表达。(2) NF-κB的表达无月经周期性改变且主要在内异症的早、中期参与作用。(3) NF-κB与VEGF、ICAM、MMP-9、Bcl-2成正相关，说明NF-κB可能通过上调VEGF、ICAM、MMP-9、Bcl-2的表达而在子宫内膜异位症的发病机制中起重要作用。(4) NF-κB蛋白在在位及异位子宫内膜细胞中有高表达，LPS可使在位及异位子宫内膜细胞的NF-κB蛋白表达增高，使IL-1β、TNF-α的浓度也显著升高，PDTC可抑制此作用。说明NF-κB做为关键性的调控因子，可能对IL-1β、TNF-α以及其它细胞因子起着中枢样调控作用。(5)用NF-κB ASODN干预治疗大鼠子宫内膜异位症模型后使成模率明显降低，异位病灶萎缩，TNF-αmRNA表达也显著降低。说明用NF-κB反义寡核苷酸抑制治疗内异症模型有效，进一步证实NF-κB与内异症的发病机制有密切关系。