论文部分内容阅读
近视是目前全球发生率最高的屈光不正,并且呈逐年上升的趋势,在亚洲部分国家和地区特定人群中尤为显著,其发病机制尚不清楚。视网膜–视网膜色素上皮–脉络膜信号转导系统在近视发病机制中的作用成为眼科研究的热点。转化生长因子β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)/Smad信号通路具有调节细胞生长、分化、凋亡、迁移和侵袭转移等多种功能,也是近视眼发病机制研究的重要信号通路之一。近期研究发现Smad核转录共抑制因子(Ski-related Protein N,Sno N)在糖尿病肾病大鼠肾脏组织中可调节通路信号的传递,Sno N的表达水平在很大程度上影响TGF-β的生物学效应,是TGF-β/Smad信号通路中重要的细胞因子。目前,人视网膜色素上皮细胞上是否有Sno N蛋白的存在及其在TGF-β/Smad信号通路中的作用尚不清楚。目的:本实验中检测了Sno N蛋白在人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞中的表达,和人重组TGF-β1(rh TGF-β1)作用下ARPE-19细胞内Sno N含量的变化,探讨核转录共抑制因子Sno N蛋白在ARPE-19细胞中表达水平及其在TGF-β/Smad通路中可能的作用。方法:在ARPE-19细胞上,用免疫荧光法(Immunofluoresent Assay,IFA)检测细胞中Sno N蛋白的表达水平以及表达部位;用不同浓度rh TGF-β1(0ng/ml,1ng/ml,2ng/ml,5ng/ml,10ng/ml,20ng/ml)、相同时间点(2h)和相同浓度rh TGF-β1(5ng/ml)、不同时间点(0min,30min,1h,2h,3h,6h,12h,24h,48h)干预ARPE-19细胞后,分别提取RNA和蛋白质,实时荧光定量PCR法(Real-time Fluorescent Quantitation Polymerase ChainReaction,FQ-PCR)检测Sno N的m RNA表达水平的差异性;用蛋白免疫印迹(Western-Blot)法检测Sno N蛋白表达水平的差异性。结果:①免疫荧光结果显示Sno N蛋白在ARPE-19细胞中有表达,且主要位于胞浆中;②不同浓度rh TGF-β1(0ng/ml,1ng/ml,2ng/ml,5ng/ml,10ng/ml,20ng/ml)作用于ARPE-19细胞2h后,与空白对照组相比,各处理组Sno N的m RNA表达量水平显著增高,明显高于对照组(P<0.05)。然而,Sno N蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05);③在相同浓度rh TGF-β1(5ng/ml)、不同时间点(0min,30min,1h,2h,3h,6h,12h,24h,48h)作用于RPE细胞后,与空白对照组相比,30min组Sno Nm RNA表达量下降,但差异无统计学意义(P>0.05),其余各处理组Sno Nm RNA表达量均上升,且差异有统计学意义(P<0.05)。然而,Sno N蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论:Sno N蛋白在ARPE-19细胞中有表达,且可能在RPE细胞TGF-β/Smad信号通路中具有被调控的作用。