乳铁蛋白也称乳转铁蛋白，是乳汁中主要的铁结合蛋白，广泛分布于多种组织、细胞内，具有非特异性免疫、参与铁代谢和细胞生长调节等功能。与其它动物乳铁蛋白相比，人乳铁蛋白更适于人类食用，为了满足需求，应选择合适的系统，进行人乳铁蛋白基因的异源表达。目前常用的表达系统中，动物乳腺是人乳铁蛋白基因表达较为合适的器官。因此，我们克隆了人乳铁蛋白cDNA，构建了乳腺特异表达载体，在小鼠乳腺癌细胞和个体内进行了表达，并利用精子载体法尝试了转基因兔、转基因羊的制备。 首先利用RT-PCR方法从人乳腺组织中扩增出乳铁蛋白cDNA序列；PCR扩增了800bp的山羊β-乳球蛋白基因5′端调控序列。通过同源序列-PCR扩增方法连接得到的片段，酶切后克隆到表达载体中，获得人乳铁蛋白基因乳腺特异表达载体pLNCXHLF。 脂质体包裹pLNCXHLF，转染小鼠乳腺癌细胞MA-782，通过G418、PCR筛选获得阳性单克隆细胞。阳性细胞用海藻酸钠包埋培养，加入激素诱导，检测结果表明：培养液上清含有人乳铁蛋白，分子量为34KD，最高含量为65mg／L／10~5细胞；重组人乳铁蛋白具有抑制E.Coli JM109生长的作用，同时具有与铁离子结合的特性。 质脂体包裹重组质粒注入到小鼠睾丸中，与正常母鼠交配产生的后代，经PCR、Southern检测，部分子鼠含有外源基因。阳性母鼠产子后，乳汁中含人乳铁蛋白，与天然蛋白具有相同的迁移率，含量为 摘要4 .8一6.79/Lo 重组质粒经质脂体包裹，注入到兔和羊的皋丸或输精管中，后代PCR、Southern检测表明，部分个体含有外源基因。翠丸注射兔产生转染精子时间较长，注射后七个月的附皋精子仍可检测到外源基因。输精管注射得到3只流产羊，外源基因在11种组织中分布不同，表明得到的个体为转基因嵌合体。