泰安市宠物源产ESBLs革兰氏阴性菌的分离鉴定及耐药与毒力基因分析

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革兰氏阴性菌广泛存在于自然界,人类和动物的肠道中。有研究指出,许多人畜共患病在宠物中表现为隐性感染,使宠物可以作为微生物的储存库。近年来,随着中国人们的物质生活不断富裕,饲养犬和猫的数量不断增多。由于在犬猫临床疾病诊治中存在不规范用药和人药宠用,宠物源革兰氏阴性菌耐药问题不容忽视,并且犬猫作为人们最亲密的伙伴,有可能将一些耐药的致病性或条件性致病性革兰氏阴性菌传播给人。本研究旨在了解泰安地区宠物医院中的宠物产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰氏阴性菌的流行情况以及耐药特点。在泰安市3家宠物医院采集98份健康与腹泻犬、猫的肛拭子和口腔拭子样品进行产ESBLs革兰氏阴性菌的分离鉴定;利用纸片法进行产ESBLs革兰氏阴性菌确证试验,并检测其对14种常用药物的耐药性;利用PCR技术检测四大类18种耐药基因(β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类、氨基糖苷类)以及Ⅰ类整合子,了解其耐药基因盒的携带情况;利用PCR技术对分离率最高的79株大肠杆菌进行16种毒力基因的检测,同时对39株奇异变形杆菌检测8种毒力基因的分布情况,了解其毒力基因特点。本研究共分离了170株革兰氏阴性菌,大肠杆菌的分离率最高,为46.47%(79/170),其次为奇异变形杆菌,分离率为22.94%(39/170);产ESBLS革兰氏阴性菌确证试验的检测结果显示,在分离的170株革兰氏阴性菌中,64株产ESBLs菌株主要为肠杆菌科的大肠杆菌和奇异变形杆菌。耐药表型检测结果显示,分离的64株产ESBLs菌株对氨苄青霉素类、四环素类、磺胺类、大环内脂类、头孢菌素类的5类、7种抗生素耐药率较高,均在45%以上;而分离的106株非产ESBLs菌株仅对四环素类、氨苄青霉素类、大环内脂类的3类、4种抗生素耐药率在45%以上,表明产ESBLs的细菌抗生素耐药现象较为严重。耐药基因检测结果显示,β-内酰胺类中,bla CTX-M耐药基因携带率最高,为47.06%,bla SHV和bla OXA耐药基因的携带率分别为27.06%、2.94%,未检测到bla PSE和bla TEM耐药基因。氨基糖苷类耐药基因中的aac(6’)-Ib-cr和aa C4的携带率分别为45.88%、42.35%,未检测到aaC1、aaC2、aaC3耐药基因。喹诺酮类中的oqxA、qnrA、qnrS、qnrB、qnrD耐药基因携带率分别为40.0%、22.4%、18.8%、6.5%、1.8%。qnrC耐药基因未检测到阳性。四环素类未检测到tetA、tet B耐药基因。毒力基因检测结果显示,87.3%的大肠杆菌携带irp2基因,35.4%的菌株携带eaeA基因,6.3%的菌株携带EAST1基因,仅有2.5%的菌株携带F17基因,而所有的菌株均未检测到hlyA、Stx1、Stx2、K88、K99、987p、LT、STa、bfpA、F18、F41、CS31A基因,5株大肠杆菌未检测到所调查的任何一种毒力基因。检测奇异变形杆菌的8种毒力基因中,毒力基因mrpA、zapA、atfA、atfC、ucaA、pmfA检出率最高,均为100%,其次是ureC毒力基因检出率为97.44%,rsbA毒力基因均没有检出。本研究通过对泰安地区三家宠物医院的犬猫肛拭子和口腔拭子样品进行产ESBLs革兰氏阴性菌的分离鉴定、常用药物的耐药情况、Ⅰ类整合子与耐药基因携带情况、毒力基因携带情况的研究发现,泰安地区中存在产ESBLs革兰氏阴性菌污染。该地区革兰氏阴性菌对多种药物表现耐受,多重耐药率达68.24%,产ESBLs奇异变形杆菌对氨苄青霉素类、四环素类、磺胺类、大环内脂类、头孢菌素类的7种抗生素耐药率在45%以上;而非产ESBLs菌株仅对4种抗生素耐药率在45%以上,表明产ESBLs菌株耐药现象较为严重。本研究旨在初步了解宠物来源革兰氏阴性菌耐药情况,对规范和限制抗生素使用及泰安地区宠物细菌感染性疾病的临床治疗具有指导意义。
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