二氢丹参酮I改善葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎实验研究

来源 :遵义医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zumei2003
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目的:  丹参是应用广泛的著名中药,具有活血化瘀之传统功效。现代研究显示,丹参中的丹参酮类具有抗肿瘤、心血管保护等作用。本研究探讨丹参中的丹参酮类成分15’,16’二氢丹参酮I(15’,16’-dihydrotanshinone, DHT)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)诱导的小鼠实验性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)的保护作用及其可能机制。  方法:  40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为四组: 空白对照组(n=8)、模型组(n=12)、DHT低剂量组(10 mg/kg,n=10)、DHT高剂量组(25 mg/kg, n=10)。采用灌胃给药,模型组提前3天给予1% 吐温80,给药组提前3天给予1% 吐温80助溶的DHT。第4天开始,模型组和给药组均给予5%DSS,连续7天;空白对照组只给予1% 吐温80。每天称量并记录小鼠体重变化,观察小鼠精神状态、大便性状(稀便、腹泻、鲜血便),计算疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分。于造模第8天处死小鼠,取血,分离血浆;取结肠,观察其大体形态,测量结肠长度,称取结肠重量。每只小鼠取一小段结肠,用于石蜡包埋切片。H&E染色观察结肠黏膜的病理变化。免疫组化法检测结肠组织中受体相互作用蛋白激酶3 ( receptor interacting protein kinase 3, RIP3)、环氧化物水解酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)蛋白的表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中高迁移率组蛋白B1(high mobility group box 1 protein, HMGB1)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor, TNF-α)、白细胞介素1β (interleukin-1beta, IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)的水平,检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)在结肠组织中的含量。蛋白免疫印迹法检测结肠组织中受体相互作用蛋白激酶1 (receptor interacting protein kinase 1, RIP1)、RIP3、混合系激酶区域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like, MLKL )、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶( cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase-8)、COX-2、iNOS蛋白的表达。  结果:  与空白对照组比较,模型组小鼠自由饮用DSS后,体重从第3-4天开始下降,且呈持续至第7天,DHT组小鼠体重下降有所改善;模型组结肠长度显著缩短,DHT组小鼠结肠长度有所增加。模型组小鼠自第4天开始,依次出现腹泻、脓血便、鲜血便,DHT组小鼠血便明显缓解。H&E染色可以看到空白对照组小鼠结肠组织正常,无显著病理变化;模型组小鼠结肠组织结构完整性被破坏,有大量炎症细胞浸润,甚至有隐窝脓肿,溃疡面脱落等;与模型组相比,DHT组小鼠结肠组织结构较为完整,炎症细胞浸润减少。与空白对照组相比,模型组结肠组织中MPO的含量显著升高,DHT组明显降低;ELISA结果显示,与空白对照组相比,模型组小鼠血浆中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、HMGB1含量明显升高,DHT组明显降低。WB结果显示,与空白对照组相比,模型组小鼠结肠组织中RIP1、RIP3、MLKL、COX-2、iNOS的表达明显增加,而Caspase-8的表达明显降低,DHT组可显著逆转它们的表达。免疫组化染色结果显示,与空白对照组相比,模型组小鼠结肠组织有强烈的棕黄色染色,显示RIP3、COX-2、iNOS的表达明显增加,DHT组可显著逆转它们的表达。  结论:  DHT可显著改善DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的一般状态,减轻炎症反应和病理变化,其机制可能与降低炎症因子、抑制RIPs、MLKL的表达等有关。本研究为揭示传统中药丹参的药效物质基础提供了实验数据支持。
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