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目的:
本实验通过蛋白免疫印迹(Westernblot)和酶联免疫法(EIASA)研究性激素结合球蛋白(SHBG)在妊娠期糖尿病(GDM)患者的胎盘中的表达水平和途径,探讨其在GDM发病机制中的作用。为GDM作用机制的研究提供新的思路与途径。
材料与方法:
一、实验分组:
选取2008年10月至2010年10月在中国医科大学附属盛京医院住院,妊娠36～41周行择期剖宫产的孕妇60例(本实验在孕妇知情同意及医院伦理委员会同意下进行)。GDM组30例,依据美国糖尿病资料小组(nationaldiabetesdatagroup,NDDG)制定的诊断标准,即葡萄糖负荷试验(oralglucosetolerancetest,OGTT),试验中空腹及服糖后1、2、3h血浆血糖水平中的2项分别达到或超过5.8mmol/L、10.6mmol/L、9.2mmol/L、8.1mmol/L。对照组30例。两组均无其他内分泌疾病,无既往糖尿病及高血压病史。年龄均在20岁～34岁,有正常的月经周期。GDM组与对照组在年龄,产次和获取胎盘孕周均无统计学差异。
二、标本的采集和处理:
剖宫产时胎盘娩出后,立即取脐带附着处相对母体面1cm×1cm×1cm和0.5cm×0.5cm×0.5cm大小绒毛组织,冷生理盐水冲洗干净,滤纸吸干后液氮速冻4h后-80℃保存用于检测。
三、指标检测:
应用westernblot和ELISA法检测GDM患者及正常孕妇胎盘中SHBG蛋白,SHBG浓度及环腺苷酸(cAMP)浓度。四、统计学分析:
采用SPSS13.0统计软件包进行处理,SHBG蛋白、SHBG浓度及cAMP浓度比较应用两独立样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
实验结果:
1、人胎盘中可检测出SHBG蛋白,并且在GDM组中表达量明显小于对照组(1.852±0.645vs2.522±0.842),差异有显著性(P<0.05);
2、SHBG蛋白、SHBG浓度及cAMP浓度在两组胎盘组织中的变化
GDM组与对照组比较:SHBG蛋白(1.852±0.645vs2.522±0.842)、SHBG浓度(2.071±0.417vs2.495±0.529)及cAMP浓度(0.817±0.105vs1.005±0.139)都显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。
3、GDM组和对照组胎盘中SHBG浓度及cAMP浓度呈正相关,且相关性显著(r=0.304,P<0.05)。
结论:
1、GDM胎盘中SHBG水平比正常妊娠孕妇胎盘组织中的表达水平显著降低。
2、GDM胎盘中cAMP水平比正常妊娠孕妇胎盘组织中的表达水平显著降低。
3、胎盘组织中SHBG水平与妊娠时cAMP的表达水平呈正相关。提示SHBG受体为G蛋白受体家族,通过cAMP-蛋白激酶途径发挥作用,进而影响胎盘功能.SHBG水平的降低会产生或加重妊娠期糖尿病。