目的随着细胞生物学和组织工程学的不断发展,为治疗骨缺损[1-2]开辟了新的领域。即在骨缺损处放置膜作为机械屏障,可将周围结缔组织阻挡于缺损处,产生特殊的再生空间,使骨生成细胞优先生长,产生新骨而达到促进骨性愈合的目的,诱导膜技术也是基于这一原理。选择理想的膜与膜下材料联合应用修复骨缺损是关键。本项目拟构建生物学活性与人体骨膜相似的组织工程骨膜,即骨髓间充质干细胞(BMSCs)[3]和取健康足月孕妇羊膜制备人脱细胞羊膜(HAAM)[4]复合而成,体外观察组织工程骨膜的生物活性,并检测其相容性,为体内修复大段骨缺损奠定基础。由于大节段负重骨缺损的修复尤为困难[5],动物试验中组织工程骨膜技术有望成为临床治疗骨缺损良方。构建的组织工程骨膜,其相关研究为骨组织工程和治疗的发展提供了新的机会,逐渐成为一个热点,为骨缺损部位制造伪骨膜提供了可能性。方法人脱细胞羊膜与家兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨膜的体外实验研究。通过HE染色、扫描电镜(SEM)下观察人脱细胞羊膜的结构,MTT描绘出骨髓间充质干细胞在人脱细胞羊膜上的生长情况,钙结节染色检测(茜素红染色、Von kossa染色)、ALP(碱性磷酸酶)的检测说明复合而成组织工程骨膜可以产生成骨细胞。人脱细胞羊膜与家兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨膜的体内实验研究。通过将体外构建的组织工程骨膜放入到家兔的大段骨缺损处,影像学检查骨缺损处骨质的生长情况。避免了大段骨缺损不愈合及治疗周期长的特点,克服了缺点,治疗评价更为全面。结果人脱细胞羊膜与家兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨膜的体外实验研究。1.通过物理和化学等方法处理人脱细胞羊膜,其表面无细胞残留,没有破坏其结构和成分,纤维组织呈网状交错分布的三维空间结构。2.通过对骨髓间充质干细胞在人脱细胞羊膜上的生长曲线检测,说明实验组增殖细胞量比对照组多。3.家兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)经过成骨诱导液诱导形成成骨细胞,碱性磷酸酶(ALP)和钙素结节是成骨细胞的标志,可以检测出ALP和钙素结节的含量。人脱细胞羊膜与家兔骨髓间充质干细胞构建组织工程骨膜的体内实验研究。统计学分析,植入骨膜后家兔的骨缺损恢复情况要好于不植入骨膜的家兔,经影像学检查,发现植入组织工程骨膜的家兔骨缺损处愈合。结论本研究基于家兔大段骨缺损的治疗,通过建立了家兔骨缺损的模型,体外评价组织工程骨膜的生物学特性,经影像学评价体内完成了家兔大段骨缺损的治疗。与传统方法相比,该系统治疗方法具有更多优势,评价指标丰富全面,弥补不足,有利于提高治疗评价结果的准确性和可重复性,有望为临床治疗大段骨缺损患者提供一种新型的治疗方法。