目的建立一个利用蛋白质芯片技术同时检测血样铁蛋白、可溶性转铁蛋白受体的检测方法,并对此检测方法的应用进行评价。方法以Western Blot印迹技术对所选抗原SF、sTfR的抗原性、抗原与抗体特异性结合能力进行验证。以酶联免疫技术对所选抗体定量检测目标蛋白进行抗体浓度确定、灵敏度确定、线性范围评价、标准曲线建立、及精密度准确度评价。利用所选抗体,进行蛋白质芯片夹心技术定量检测目标蛋白的固定探针选择、点样方式选择、点样一致性比较、抗体特异性交叉反应、固定探针与检测抗体浓度优化、封闭时间比较、封闭剂与二抗优化、灵敏度分析、线性范围评价与标准曲线建立、可报告范围确定、精密度与准确度确定及干扰性评价、方法稳定性评价、检测时效评价等研究。结果Western Blot实验结果证明所选抗原具有稳定的抗原性,所选抗体具有与目标抗原特异性结合的能力,能够用于进一步的方法建立。酶联免疫实验初步建立了对两种目标蛋白进行定量检测的技术方法,为完成蛋白芯片检测方法奠定了基础。蛋白质芯片检测SF、sTfR的检测方法最终选用鼠抗做为固定探针、以接触式点样为点样方式、选取前40点为预点样区段、40—200点为点样一致性区段、交叉反应实验结果显示不同抗体与不同抗原之间不存在交叉反应；SF固定探针与检测抗体的浓度确定为0.5 mg/ml与5μg/ml, sTfR固定探针与检测抗体的浓度确定为0.5 mg/ml与0.36μg/ml;不同封闭时间对检测结果不产生有统计学差异的影响；选择以3%BSA为封闭剂、以GE公司的Cy3标记的羊抗兔IgG为二抗；SF检测低限为0.788 ng/ml、生物检测下限为2 ng/ml, sTfR的检测低限为0.446ng/ml,生物检测限为1.56 ng/m；分别选择以一项式回归方程为SF检测回归方程、以二项式回归方程为sTfR检测回归方程；方法所确定的二者的可报告范围分别是：SF可报告上限为4100 ng/ml、下限为2 ng/ml, sTfR可报告上限为5000 ng/ml、下限为1.56 ng/ml;SF批内变异系数最大时不超过8.69%,批间变异系数最大时不超过18.38%,sTfR批内变异系数最大时不超过8.88%,批间变异系数最大时不超过12.8%；SF稀释回收率最小时为104%,加标回收率的系统比例误差最小时不超过5%,sTfR稀释回收率最小时为107.5%,加标回收率最小时不超过5%；方法学比较的配对t检验结果显示,蛋白芯片检测SF与sTfR的结果与比浊法间的差异无统计学意义,蛋白芯片法检出铁缺乏者的能力与比浊法间的差异经X2检验无统计学意义；人血清白蛋白与甘油三油酸酯对蛋白芯片检测方法不存在干扰；蛋白芯片在点样后38天之内检测浓度结果间的差异无统计学意义；在完成二抗杂交后22天之内,蛋白芯片的浓度结果间的差异无统计学意义。结论建立了利用蛋白质芯片技术同时检测SF与sTfR的检测方法,此方法具有较好的精准度与实用性,能够满足实验室检测需要。