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以牛睾丸为材料，通过0.01mol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.5，内含0.2mol/L NaCl)抽提、硫酸铵分级分离获得粗酶，通过DEAE-Cellulose(DEAE-32)阴离子交换柱、Sephacry S-300凝胶过滤柱层析2次层析纯化，获得比活力为658.21 U·mg1的聚丙烯酰胺凝胶电泳单一纯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂(NAGase，EC3.3.1.52)。测得酶的等电点为5.54，分子量约为68.3 kDa，每个酶蛋白分子含有364个氨基酸残基，其中非极性占35.2％，碱性占16.4％，酸性占24.2％；极性不带电荷的占24.2％。该酶为单亚基酶，肽链内含有二硫键。该酶为糖蛋白，其中含糖量为3.03％(W/W)。以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖(pNP-NAG)为底物，测得该酶在0.2mol/L磷酸缓冲液(pH5.6)中催化水解pNP-NAG的最适pH为5.6，最适温度为50℃。该酶在pH3.0～6.6区域较稳定；在55℃以下处理30 min，酶活力保持稳定。在pH5.6的条件下，酶水解pNP-NAG的米氏常数Km为0.71mmol·L-1，最大反应速度Vm为16.716μmol·L-1·min-1，酶催化pNP-NAG反应的活化能Ea为64.19kJ·mol-1。
金属离子对牛睾丸NAGase活力影响的研究表明：Na+在低浓度(0～10mmol/L)下对酶的活力没有影响，在高浓度(0～1.0mol/L)下， Na+对酶有微弱的抑制作用。Cu2+对酶有微弱的抑制作用。Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶有不较强的抑制作用。Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶的抑制表现均为可逆非竞争性抑制机制，Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+对酶的抑制常数KI分别为75.26mmol·L-1、87.37 mmol·L-1、2.21 mmol·L-1和41.18 mmol·L-1。
研究15种氨基酸对牛睾丸NAGase活力影响的结果表明：在特定浓度范围内，L-Ile、L-Met，L-Phe、L-Ala，L-Leu，L-Pro等非极性氨基酸对牛睾丸NAGase的活力没有显著影响， L-Thr、L-Gly、L-Gln、L-Ser、L-Asn、L-His等极性氨基酸对酶活力也没有显著影响，L-Val对酶活力有微弱的激活作用，L-Arg、L-Lys对牛睾丸NAGase有不同程度的抑制作用。L-Arg对酶的抑制表现为可逆非竞争性机制，L-Arg的KI为24.22 mmol·L-1。L-Lys对酶的抑制表现为可逆反竞争型机制，其K1为3.597 mmol·L-1。
牛精液稀释成分青霉素钠、硫酸链霉素对酶的活力没有影响。柠檬酸钠对酶有微弱的抑制效应，氯化钾对酶有先扬后抑作用。葡萄糖和碳酸氢钠对酶有不同程度的抑制作用，葡萄糖对酶的抑制作用表现为可逆竞争性抑制机制，其局为0.36 mol·L-1。碳酸氢钠对酶的抑制作用表现为可逆反竞争性抑制机制，其抑制常数K1为7.01 mmol·L-1。