基于微图案硅基晶片的生物检测研究

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生物芯片和微阵列是生物检测技术的一个重要发展趋势。在芯片制备中,选择合适的基片材料与点阵排列,降低点阵与背景、点阵与点阵之间的信号干扰,是需要解决的课题之一。本文设计了微图案SiO2/Si硅基晶片和微图案Au/SiO2硅基晶片两种基材,对其表面处理、生物检测可行性以及在相关光学检测方法中的应用进行了探讨,主要研究内容如下:1、微图案SiO2/Si硅基晶片的表面处理与修饰,采用浓H2SO4/H2O2、浓HCL/H2O2/H2O、NH4OH/H2O2/H2O三种清洗液对其表面进行亲水化处理,结果显示H2SO4/H2O2溶液的处理效果最好,最佳处理时间为30分钟。同时对微图案SiO2/Si晶片表面的共价修饰方法和疏水化处理方法进行了比较,结果表明,前者对蛋白质的固定效果优于后者。对微图案Au/SiO2晶片,采用MUA修饰其表面,接触角测量结果表明,Au/SiO2晶片表面已成功修饰MUA,可进一步与生物分子连接。2.微图案SiO2/Si晶片和微图案Au/SiO2晶片用于蛋白质荧光检测。结果表明,两种晶片固定人IgG底物的最佳浓度均为100mg/L,两种晶片均在图案区获得相当强的荧光信号,而非图案区背景信号很低,可作为基材用于蛋白质芯片检测。对两种硅基晶片进行表面元素的XPS分析,证明蛋白质已与晶片图案区很好地结合。对蛋白质的检测结果表明,微图案SiO2/Si硅基晶片和Au/SiO2硅基晶片表面的蛋白质检测灵敏度均为10μg/L。3.微图案SiO2/Si晶片和微图案Au/SiO2晶片用于DNA荧光检测。两种微图案硅基晶片均在图案区获得相当强的荧光信号,而非图案区背景信号很低,表明SiO2/Si晶片和Au/SiO2晶片用于DNA检测,可完全排除背景信号的干扰,确定了SiO2/Si晶片和Au/SiO2晶片可作为其它DNA检测方法的芯片基材而进一步推广应用。分别考察了两种晶片的DNA检测灵敏度,结果表明,微图案SiO2/Si晶片表面的DNA检测限为10pM,Au/SiO2晶片表面的DNA检测限为100pM。4、采用椭偏检测和双光束干涉光学检测法对微图案SiO2/Si硅基晶片表面蛋白质膜层厚度进行分析。椭偏检测的结果显示,SiO2/Si硅基晶片表面蛋白质膜层的平均厚度为4.3nm;通过双光束干涉光学检测系统检测不同浓度的兔抗人IgG所输出的信号,结果显示其厚度增加约4.27nm,与椭偏检测的结果相吻合。这表明微图案SiO2/Si硅基晶片可以应用于免标记的光学检测系统。
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