辣椒果实细胞学、转录组分析及赤霉素受体CaGID1s和DELLA蛋白CaGAI功能、互作研究

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从一个辣椒RIL (recombinant inbred line,重组自交系)群体中选出果实大小和形状各异的49份材料,连同双亲及杂交一代共52份材料为试材,对子房和成熟果实进行细胞学研究发现,在辣椒果皮横切和纵切面上,果皮(子房壁)的结构很保守,在授粉之前已经确定,果皮细胞可以清晰的划分为:外果皮、中果皮和内果皮细胞。相关性分析表明,果实横径的生长模式比较保守;除细胞形状外,细胞数目也在很大程度上影响果实形状。从果实的宏观生长来看,果实横径与果皮厚度正相关,果实纵径与二者不相关,呈现出异速增长模式,形成了果实形状的多样性。果皮细胞的生长模式与果实宏观生长相似,也表现出异速增长模式。以羊角形辣椒自交系“0819”为试材,研究了果实生长过程中外部形态和细胞的动态变化。“0819”果实生长过程中,果实纵径、横径和果皮厚度具有相似的“S”形生长曲线,在纵向和横向切面上,中果皮细胞平均面积增长曲线也大致呈“S”形。细胞径向分裂主要发生在果实生长早期的最外层细胞,以增大果实横切面周长适应中果皮细胞的膨大;在10DAP (days after pollination,授粉后天数)之前,外果皮及中果皮细胞进行活跃的横向分裂,是果实纵径伸长的重要影响因素;平周分裂主要发生在外层亚表皮细胞层,大约在20DAP停止。细胞膨大主要发生在中果皮,并对果实横径、果皮厚度以及后期的果实纵径伸长起决定作用。采用ELISA方法,对0、5、10、50DAP果实中IAA、 GA、 ZR和ABA的含量进行测定,发现种子和胎座中激素含量的变化趋势大致相同,而果皮中的变化趋势与之有明显差异。在5DAP时辣椒种子中赤霉素含量升高,生长素含量降低,而在5DAA-NP时种子生长素含量仍然较高,赤霉素含量降低,说明赤霉素可能是促进辣椒果实坐果的主要激素,而且授粉受精后种子中赤霉素的合成并非与生长素的大量合成相关。对0、5、10、50DAP果实进行转录组测序,发现在5和10DAP专一表达的基因数目比0DAP和50DAP专一表达的基因数目少,说明5和10DAP果实主要进行膨大生长,生长状态相似,而0DAP和50DAP时,果实(子房)进行着更为复杂的反应;植物激素相关基因的表达也显示,5DAP和10DAP的果实基因的表达模式相似。同源克隆了3个赤霉素受体基因CaGIDlb.1、 CaGIDlb.2和CaGID1c,以及一个赤霉素信号转导途径中的负调控因子DELLA蛋白基因CaGAI。通过基因表达定量分析,发现在辣椒坐果过程中,CaGIDlb.2在果皮和胎座中发挥着重要作用;而CaGIDlb./则在种子中可能有更重要的作用。在果实生长发育的过程中,CaGIDIb.l和CaGIDlb.2可能比CaGIDlc有更重要的作用。将CaGIDlb.1、 CaGIDlb.2和CaGID1c在拟南芥双突变体gidlagidlc中过表达,株高显著增加;将CaGAI在拟南芥双突变体rga-24/gai-t6中过表达,株高降低,表明CaGIDls和CaGA1影响植株茎的伸长,与拟南芥中AtGID1和AtGAI的作用相似。酵母双杂(Y2H)和荧光双分子互补(BiFC)试验表明,在GA3存在的条件下,CaGID1b1和CaGID1b2可以与CaGAI相互作用;而CaGID1c与CaGAI的相互作用不依赖于GA3。
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