人胎盘纤维蛋白溶酶原的分离纯化和增强溶栓效果实验研究

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第一部分人胎盘纤溶酶原的分离纯化及活性测定 目的:从人胎盘中分离纯化人纤溶酶原(HumanPlasminogen,HPlg或HPg),并鉴定其含量和活性,为制备人纤溶酶原寻找一种新途径。 方法:以人新鲜胎盘为原料,采用硫酸铵盐析法、Lysine-Sepharose4B和SephadexG-25层析法,分离纯化人纤溶酶原,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检验纤溶酶原纯度并测定其分子量,以免疫比浊法、发色底物法分别测定其含量及活性。 结果:该方法得到分子量为92KDa的单一组分天然人纤溶酶原,纯度、含量和活性均高。 结论:HPlg可从人胎盘中制备,具有大规模生产和进一步研究的价值。 第二部分人纤溶酶原增强溶栓的体外实验研究 目的:检验自备人胎盘纤溶酶原(HumanPlasminogen,HPlg)在体外增强溶栓的效果。 方法:1、血栓的制备:抽取健康自愿者动脉血放置2h和24h,分为等量大小放入试管内;2、实验组加入定量的HPlg和尿激酶,对照组分别加入盐水、肝素和尿激酶和实验组等量的进口HPlg和尿激酶,置于摄氏37℃水浴箱内2h和24h后,检查残余血栓的重量,比较HPlg增强溶栓效果。 结果:自备HPlg能增强体外溶栓的效果,与进口HPlg比较,某些组间统计学差异。 结论:自备HPlg能增强体外溶栓的效果。 第三部分自备人纤溶酶原增强溶栓的动物实验研究 目的:观察自备人胎盘纤溶酶原(HumanPlasminogen,HPlg)在猪下腔静脉血栓中的增强溶栓效果和介入法药物-机械溶栓效果。 方法:用31只家养健康仔猪制作48h下腔静脉血栓模型,成功26只,26只分为5组,对照血栓组(A组):不溶栓,取血栓求血栓平均湿重,作为其它组溶栓前的血栓标准重量,并行病理检查;对照组1(B组):尿激酶(UK)+普通直头导管给药组;实验组1(C组):HPlg+UK+普通直头导管给药组;对照组2(D组):UK+脉冲-喷雾导管给药组;实验组2(E组):HPlg+UK+脉冲-喷雾导管给药组。溶栓前2h猪腹前壁皮下注射低分子肝素钠(LMWH)5000U抗凝,各组均溶栓2小时。溶栓前、溶栓1h、溶栓2h经股静脉插管行血栓的影像学(DSA)评价再通率。同时段抽血行血气分析(PaO2、SaO2、PaCO2)、血小板(PLT)、凝血功能(APTT、PT、TT、Fig)、和D-二聚体(D-dimer)(乳胶凝聚法,半定量)检测,溶栓结束后肺动脉造影,取下腔静脉残余血栓称重,计算溶栓率;取各组部分血栓和肺组织行病理检查。 结果:猪下腔静脉血栓模型成功率为83.87%(26/31),血栓病检提示为混合血栓。自备人胎盘纤溶酶原增强溶栓和药物-机械溶栓效果明显,血管再通时间较早,再通率较高。 结论:自备人胎盘纤溶酶原能有效增强溶栓作用,直接血栓内增强溶栓效果确切,为血栓的治疗提供了新的方法,值得进一步的深入研究。
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