论文部分内容阅读
目的 氯胺酮是苯环己哌啶类静脉麻醉药，因其具有稳定心血管功能的作用，故应用于脓毒血症患者的麻醉和镇痛中较为有益。近年来研究发现，氯胺酮具有明显的抗炎作用，但其抗炎机制尚不清楚，其对炎症反应中内皮细胞的活化是否具有抑制作用还存在争论。因此，本研究选用12.5、25、100、300μmol／L四个浓度的氯胺酮，来探讨氯胺酮对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)作用下人脐静脉内皮细胞表面ICAM-1的表达及NF-κB易位活化的影响，同时观察氯胺酮对趋化因子(formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine，FMLP)刺激下白细胞表面CD11b的表达和白细胞-内皮细胞黏附率的影响。 方法 人脐静脉内皮细胞经胰酶消化后，在RPMI1640培养液中，37℃下培养10天左右，直至传代的内皮细胞长满至单层。设立空白对照组和实验对照组(仅加入LPS)，其余各孔加入不同浓度的氯胺酮(12.5、25、100、300μmol／L)或MK-801(1.25、2.5、10、30μmol／L)，温育30min后，加入LPS作用18h。然后用流式细胞仪测定ICAM-1的表达。在另外一组实验中，在加入不同浓度的氯胺酮(12.5、25、100、300μmol／L)或MK-801(1.25、2.5、10、30μmol／L)，温育30min后，加入LPS作用2h，用免疫组化的方法测定NF-κB表达的变化。 白细胞采用Percoll-Ficoll的方法进行分离。设立空白对照组和实验对照组(仅加入FMLP)，其余各孔加入不同浓度的氯胺酮(12.5、25、100、300μmol／L)或MK-801(1.25、2.5、10、30μmol／L)，温育30min后，加入FMLP，作用20min。然后用流式细胞仪测定CD11b的表达，用龙胆紫染色的方法测定白细胞与内皮细胞间黏附率的变化。 结果 在静止状态下，ICAM-1在人脐静脉内皮细胞表面仅有少量表达(平均荧光密度7.91±1.37)，LPS 1μg／ml作用18h，可使内皮细胞表面ICAM-1的表达增加到50.45±3.45；25、100、300μmol／L三个浓度的氯胺硕士学位论文氛胶酮抗炎作用的研究(中文摘要)酮对内皮细胞表面ICAM·1的表达则具有明显的抑制作用(P<0.05)。在LPS1协g/m1作用2h后，胞质中NF一KB的易位活化升高了近5倍(平均荧光密度61.90士1.69):)25协mo比的氯胺酮可明显抑制NF一KB的易位活化 (P<0.05)。氯胺酮对ICAM.1表达的抑制与对NF一KB易位活化的抑制呈正相关关系(件0.985，P<0 .01)。MK一801对IcAM.1的表达和NF一KB的易位活化无影响。 白细胞在FN几P(l护mo比)的作用下，其表面CDllb的表达及白细胞与内皮细胞间勃附率明显增高，本研究所选用的不同浓度的氯胺酮对白细胞的活化均具有明显的抑制作用，MK一801则无此作用。 结论氯胺酮可抑制RM工P刺激下白细胞的活化;)25 p mo巩的氯胺酮对LPS作用下内皮细胞的活化也有明显的抑制作用。氯胺酮的抗炎作用并非由N侧[DA受体介导，对N下一KB易位活化的抑制可能是其抗炎作用的机制之一。