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目的运用无血清成球培养法和以Cripto-1（CR-1）为表面标志物从人食管鳞癌（Esophagealsequamous carcinoma cells，ESCCs）细胞系中分离/富集肿瘤干细胞，并对其“干性”特性进行鉴定。方法1.EC109细胞于添加1×B27的无血清干细胞培养基（DMEM/F121：1）和poly-Hema包被的培养皿或低黏附培养板中培养，获取细胞球。采用实时定量PCR方法检测干性相关转录因子的表达，以连续传代和平板克隆形成实验评价其自我更新能力，免疫荧光细胞化学法检测其分化前后干性相关转录因子和分化标志物的表达变化，并用裸鼠移植瘤实验检测其体内成瘤能力。2.以免疫组化方法检测临床标本上CR-1的表达与临床病例参数及临床预后的关系，确定CR-1在ESCCs中表达的意义。然后将CR-1作为ESCCs肿瘤干细胞候选标志物，用流式细胞仪从EC-109和TE-1细胞中分选出CR-1HIGH和CR-1LOW两个细胞亚群，比较两个细胞亚群在干性基因表达、平板克隆形成能力和体外侵袭能力上的差异。采用RNA干扰技术沉默CR-1表达后，观察EC109和TE-1细胞成瘤能力的改变。结果1.在优化的无血清成球培养条件下，培养5天能获得EC109细胞的细胞球。细胞球细胞高表达Sox2等干性相关转录因子，具有自我更新能力、分化潜能。裸鼠体内1×104个细胞球细胞能启动肿瘤形成，而单层培养细胞则需要1×105个细胞，且同数量级的细胞球细胞较单层培养细胞所形成的肿瘤体积大。2. ESCC组织表达CR-1，且与侵润深度、淋巴结转移呈正相关（p=0.023和0.032），与病人生存时间呈负相关（p﹤0.001）。EC-109和TE-1细胞系均表达CR-1，流式分选结果显示两个细胞系中CR-1HIGH细胞亚群比例分别为2.27%和1.96%。CR-1HIGH细胞亚群的干性基因表达、平板克隆形成能力和体外侵袭能力均显著强于CR-1LOW者。沉默CR-1表达后，成瘤能力显著降低。结论1.无血清成球培养法能从食管鳞癌细胞系EC109获得细胞球，细胞球富集了肿瘤干细胞，为食管癌干细胞的深入研究奠定了基础。2. ESCC组织表达CR-1，与ESCCs恶性程度和预后密切相关。初步的实验结果显示CR-1可用作ESCC干细胞的细胞表面标志物，但进一步的评估实验有待完成。