【摘 要】
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目的研究人晶状体上皮细胞(Lens epithelial cells,LECs)细胞内游离Ca2+浓度变化对AQP1表达的影响;研究人LECs细胞内游离Ca2+浓度变化对细胞活性的影响。以期探讨细胞内游离Ca2+
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目的研究人晶状体上皮细胞(Lens epithelial cells,LECs)细胞内游离Ca2+浓度变化对AQP1表达的影响;研究人LECs细胞内游离Ca2+浓度变化对细胞活性的影响。以期探讨细胞内游离Ca2+浓度与AQP1的关系及其在年龄相关性白内障中的可能发病机制。方法1.采用不同浓度钙培养液(正常培养液、增加钙浓度0.5、1.0、5.0、10.0mmol/L)培养人LECs2、6d。采用Flou-3钙荧光探针负载后应用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内游离Ca2+浓度的变化;应用免疫细胞化学染色法及Western Blot法检测细胞内游离Ca2+浓度变化对AQP1表达的影响。2.采用不同浓度钙培养液(正常培养液、增加钙浓度1.0、5.0、10.0mmol/L)培养人LECs72h,应用CCK-8检测细胞活性,TUNEL法检测凋亡变化;利用透射电镜观察细胞超微结构变化,并进行比较。结果1.激光扫描共聚焦显微镜示钙处理组荧光强度值增高,随着培养液Ca2+浓度增加,荧光强度值逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫细胞化学染色法及Westernblot检测示钙处理组人LECs AQP1表达下降((P<0.01)),随着细胞内游离Ca2+浓度升高,AQP1表达进一步下降,组间差异有统计学意义(P<0.05)。2.培养液增加钙浓度为1.0mmol/L时,细胞活性、凋亡率无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);培养液增加钙浓度为5.0mmol/L,细胞活性下降,凋亡率增高,差异有统计学意义(P﹤0.05),随着细胞内游离Ca2+浓度增高,细胞活性继续下降,凋亡率升高,组间差异有统计学意义(P﹤0.05)。3.透射电镜观察示培养液增加钙浓度为1.0mmol/L时,人LECs超微结构无改变;培养液增加钙浓度为5.0mmol/L,人LECs出现凋亡形态学改:核染色质凝集、固缩、边集,细胞质线粒体肿胀,内质网水肿等。结论1.体外培养的人LECs细胞内游离Ca2+浓度升高,AQP1表达减少。2.体外培养的人LECs细胞内游离Ca2+浓度轻度升高,细胞活性、凋亡无影响;细胞内游离Ca2+浓度异常增高,则细胞活性降低,细胞发生凋亡。3.细胞内游离Ca2+浓度升高,可能通过降低LECs AQP1的表达、诱导LECs凋亡,是年龄相关性白内障发病机制之一。
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