【摘 要】
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水貂病毒性肠炎(Mink viral enteritis)是由水貂肠炎细小病毒引起的一种急性、高度接触性传染疾病,该病以腹泻为主要特征。其具有较高的发病率和死亡率,是世界公认的危害水貂
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水貂病毒性肠炎(Mink viral enteritis)是由水貂肠炎细小病毒引起的一种急性、高度接触性传染疾病,该病以腹泻为主要特征。其具有较高的发病率和死亡率,是世界公认的危害水貂饲养业较大的病毒性传染病之一,给养貂业带来了巨大的经济损失。同其他病毒病一样,水貂病毒性肠炎的防治也主要以预防为主。病毒样颗粒(Virus-like particles)是由病毒单一或多个结构蛋白自行装配而成的高度结构化的蛋白颗粒。在形态上,病毒样颗粒类似未成熟的病毒粒子,但是由于缺乏调节蛋白和感染性核酸,无复制和感染能力。虽然缺乏感染性,但病毒样颗粒具有天然病毒的类似嗜性,能被细胞摄取并在细胞内运输,激发全面免疫反应。本研究利用杆状病毒表达系统有效的表达了MEV VP2基因,进行了MEV病毒样颗粒制备研究。本研究以MEV VP2蛋白表达后可自行组装为病毒样颗粒,并仍然保持其免疫原性为理论基础,应用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac系统)构建了能表达MEV VP2蛋白的重组杆状病毒,建立了以其为基础的MEV亚单位疫苗制备方法。以水貂肠炎病毒(MEV)SMPV-11株为模板PCR扩增获得其VP2基因,VP2基因经克隆测序分析表明该病毒归属我国目前MEV主要流行的抗原型MEV-1型。将SMPV-11株VP2基因与pFastBacⅠ载体分别酶切后进行克隆连接,成功构建重组质粒pFastBack-VP2穿梭载体。将穿梭载体转化到DH10Bac中,经蓝白斑及抗性筛选,获得了重组VP2的杆粒Bacmid-VP2。杆粒应用脂质体转染Sf9细胞,获得了能感染该细胞的重组杆状病毒rBacMEV-VP2。细胞感染后分别经投射电镜观察证实rBacMEV-VP2可在Sf9细胞内表达VP2蛋白,蛋白表达后可形成细小病毒样粒子。该表达产物分别经Western-blotting及间接免疫荧光试验检测,证实表达的VP2蛋白能够被MEV单克隆抗体识别。将重组杆状病毒rBacMEV-VP2表达的VP2蛋白经离心纯化作为亚单位疫苗,并以铝胶佐剂制备MEV疫苗。分别以100μg、500μg不同剂量免疫日本大耳白兔,免疫后2w动物血清MEV HI抗体呈阳性,3w后抗体可达到最高水平,分别为1:108.8、1:204.8。实验证明病毒样颗粒制备的MEV疫苗,其产生抗体水平不低于商品化的MEV灭活疫苗。
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