研究背景:经过长期体外和动物疾病模型治疗的研究,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)作为细胞移植、细胞治疗的来源比较广泛的理想种子细胞。在长期的科学研究下,间充质干细胞已可被成熟的运用到组织器官的修复与再生。而如何使间充质干细胞向神经样细胞定向分化,提供一种可用于临床使用安全的诱导方式是脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)领域的研究热点。蒙医是蒙古族人民同疾患做斗争的经验总结,并吸收藏医、中医经验并结合藏医、中医的理论逐渐形成的,是我国的医学文化瑰宝。其中蒙药如意珍宝丸广泛用于临床中,珍宝丸蒙文名称为额尔敦乌日乐,是神经内科的一线药物,用于保护神经细胞,以防神经损伤的急性期神经细胞进一步的死亡,起到神经损伤后的神经保护功能,并对中枢神经与周围神经的修复有一定的作用。试验表明珍宝丸对于神经样细胞增殖有一定的影响,对急性脊髓损伤后的大鼠周围神经具有保护作用。故而本文将探讨蒙药珍宝丸对于人脂肪间充质干细胞向神经元细胞定向分化的影响。目的:用蒙药珍宝丸的药物血清培养从术中收集的脂肪中得到的脂肪间充质干细胞。探究珍宝丸药物血清对于间充质干细胞向神经元细胞定向分化的影响,从而找到一种新的、可靠的、安全的诱导剂。为间充质干细胞移植治疗脊髓损伤提供新的思路,为珍宝丸对间充质干细胞向神经元细胞定向分化提供理论依据。方法:选取7周龄成熟wistar大鼠,珍宝丸药物灌胃,取血清,制备药物培养基。收集术中脂肪,从中提取脂肪间充质干细胞并分离纯化,而后进行细胞鉴定。随后使用不同药物血清浓度的药物培养基刺激脂肪间充质干细胞不同时间,与丁羟基茴香醚(BHA)化学方法诱导分化相对比,分别使用RT-PCR、Western blot从mRNA和蛋白质水平检测NSE(神经元特异烯醇酶)表达的变化。结果:1、流式细胞术提示,该细胞强阳性表达CD-49d(86.0%)、CD-13(95.3%)、CD-59(89.6%),阴性表达CD106(0.2%)。2、RT-PCR提示:经药物血清刺激的脂肪间充质干细胞可增加神经元特异性蛋白NSE的mRNA表达。并与未经药物血清诱导的脂肪间充质干细胞存在明显差异。3、Western blot提示:经药物血清刺激的脂肪间充质干细胞可表达神经元细胞的特异性蛋白NSE的表达。并发现随着刺激时间的增加与延长,特异性蛋白NSE的表达量增加。结论:1、蒙药珍宝丸可以诱导脂肪间充质干细胞向神经元细胞的定向分化。2、在本次诱导分化的实验中,蒙药珍宝丸的诱导作用强于丁羟基茴香醚的诱导作用。3、本实验中蒙药珍宝丸的药物血清浓度为10%时,对脂肪间充质干细胞向神经元细胞的诱导分化作用最强。