本研究通过细胞生物学和分子生物学手段,研究了H9N2亚型禽流感病毒NS1A重组蛋白联合中药黄芩的有效成分黄芩苷诱导人肺癌细胞SPC-A1凋亡的作用。首先,在NS1A蛋白诱导人肺癌细胞SPC-A1凋亡的基础上,通过PCR重叠延伸技术将表皮生长因子基因、绿脓杆菌外毒素转膜系统基因和NS1A基因重组,获得NS1A重组基因,构建原核表达载体pET-20b-ETN,制备多克隆抗体。构建真核表达载体,在杆状病毒表达系统实现了NS1A重组蛋白的表达,纯化后,通过荧光染色结合流式细胞仪分析等方法研究其对肺癌细胞SPC-A1的凋亡作用。结果表明,重组蛋白明显抑制SPC-A1细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性,能诱导肿瘤细胞凋亡。其次,利用肺癌细胞SPC-A1研究黄芩苷抗肿瘤活性,结果表明,随作用时间延长,SPC-A1细胞增殖抑制率明显增高,黄芩苷能诱导肿瘤细胞凋亡。最后,对NS1A重组蛋白联合黄芩苷对SPC-A1细胞的凋亡作用进行研究,结果表明,联合用药48h后,随黄芩苷浓度增高,二药的协同作用增强。Rhodamine123结合流式细胞仪分析检测细胞线粒体膜电位降低,细胞通透性增高。提取细胞浆蛋白质,利用特异性发色底物检测Caspase-3活性,结果Caspase-3活性显著增高。本研究表明,NS1A重组蛋白联合黄芩苷的抗肿瘤作用显著,达到了协同及增效减毒作用,显示了联合用药的优势,为癌症联合用药治疗提供了理论依据。