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【研究背景】【目的】本实验观察DHM是否促进WAT棕色化抵抗高脂饮食诱导的肥胖,其作用机制是否是通过AMPK-Sirt1-PGC1α信号通路来发挥的,该研究为肥胖的治疗提供了新的思路和方向。【方法】将c57bl/6j小鼠随机分成6组:1.正常对照组(normal diet,ND组):正常小鼠采用普通饲料喂养,同时用双蒸水(1次/天,灌胃)处理16周;2.正常对照+低剂量二氢杨梅素组(ND+L-DHM组):正常小鼠采用普通饲料喂养,同时用125mg/kg/d的二氢杨梅素(1次/天,灌胃)处理16周;3.正常对照+高剂量二氢杨梅素组(ND+H-DHM组):正常小鼠采用普通饲料喂养,同时用250mg/kg/d的二氢杨梅素(1次/天,灌胃)处理16周;4.高脂饮食组(high fat diet,HFD组):正常小鼠采用高脂饲料喂养,同时用双蒸水(1次/天,灌胃)处理16周;5.高脂饮食+低剂量二氢杨梅素组(HFD+L-DHM组):正常小鼠采用高脂饲料喂养,同时用125mg/kg/d的二氢杨梅素(1次/天,灌胃)处理16周;6.高脂饮食+高剂量二氢杨梅素组(HFD+H-DHM组):正常小鼠用高脂饲料喂养,并且用250mg/kg/d的二氢杨梅素(1次/天,灌胃)处理16周。每两周测一次体重和空腹血糖,16周后,从小鼠眼眶静脉取血测量血脂,处死动物后,测量体重和体长(从小鼠鼻尖到肛门的距离),算出Lee’s指数(Lee’s指数=(体重*1000)^(1/3)/体长(cm))。取肩胛下、腹股沟和附睾处脂肪组织称重,随后,将这些脂肪组织一部分甲醛固定,苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色来观察脂肪细胞大小,免疫组化检测棕色化基因UCP1的表达;另一部分通过实时定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,RT-q PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)检测各组小鼠脂肪组织中WAT棕色化因子(UCP1,Prdm16)和AMPK-Sirt1-PGC1α信号通路相关蛋白的表达。【结果】高脂饮食喂养小鼠16W后,HFD组小鼠体重高于ND组体重20%,提示肥胖小鼠模型复制成功。从第8W开始,HFD组体重和血糖明显高于ND组,HFD组体脂重量、Lee’s指数/血糖和血脂明显高于ND组,L-DHM和H-DHM能显著降低高脂饮食喂养的肥胖小鼠体重、体脂重量,Lee’s指数、血糖和血脂;但DHM对正常小鼠上述指标无显著影响。HE染色所示:与ND组相比,HFD组小鼠肩胛下、腹股沟和附睾处的脂肪细胞大小明显增大,HFD+L-DHM和HFD+H-DHM组的小鼠脂肪细胞明显小于HFD组,但DHM对正常小鼠脂肪细胞并无明显影响。免疫组化结果显示:HFD组小鼠肩胛下,腹股沟和附睾处脂肪组织的棕色化因子UCP1的表达明显低于ND组,HFD+L-DHM和HFD+H-DHM组脂肪组织中UCP1的表达明显高于HFD组。PCR和Western Blot检测结果显示:与ND组相比,HFD组中的UCP1,Prdm16,AMPK,PGC1α,Sirt1的基因和UCP1,Prdm16,AMPK,PGC1α,Sirt1的蛋白表达明显降低,L-DHM和H-DHM可以显著提高肥胖小鼠的UCP1,Prdm16,AMPK,PGC1α,Sirt1的基因和UCP1,Prdm16,AMPK,PGC1α,Sirt1的蛋白的表达,但是DHM对正常小鼠上述指标无影响。【结论】杨梅素促进白色脂肪棕色化抵抗高脂饮食诱导的肥胖;二氢杨梅素可能经AMPK-Sirt1-PGC1α信号通路促进WAT棕色化。