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有机锡化合物是近年来研究较活跃的一类金属有机化合物，研究发现其中的三烃基锡化合物有较强的抗肿瘤作用，对多种肿瘤细胞具有明显的抗增殖作用，可诱导肿瘤细胞凋亡。T<,1>。(triphenyltin 2－phenyl-l，2，3－triazole－4－carboxylate)属于三苯基锡，是新合成的具有抗肿瘤活性的有机锡羧酸酯化合物。目的：研究T<,1>对体外人宫颈癌HeLa细胞增殖抑制和凋亡诱导作用，并初步探索其作用机制。
方法：用MTT试验、细胞生长曲线测定细胞增殖，改良二苯胺法测定细胞DNA含量，考马斯亮蓝法测定细胞蛋白含量；通过荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态学改变，琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA片断化以及流式细胞术对细胞凋亡及细胞周期的测定，观察对HeLa细胞增殖周期的影响并初步探索T<，1>抑制肿瘤细胞增殖的机理；SABC法检测凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白的表达，荧光染色后流式细胞仪检测细胞线粒体跨膜电位变化，比色法检测半胱氨酸天冬酶-3(caspase-3)的活性，MTT试验分别测定caspase-3抑制剂DEVD-CH0和广谱caspase抑制剂z-VAD-fmk对T<,1>诱导的细胞凋亡的阻断作用。
结果：MTT实验结果表明，T<,1>可浓度依赖地抑制HeLa细胞增殖，药物作用96h IC<,50> 为7.82±0.35rim(4.45±0.84rig／m1)，48h IC<,50>为17.46±0.77nM(9.39±0.42ng／ml)。以台盼蓝拒染的活细胞计数，绘制细胞生长曲线，发现T<,1>可显著延长细胞倍增时间，并且具有浓度依赖性。T<,1>25nM作用HeLa细胞48h后，细胞内DNA含量显著降低；不同浓度(6.25、12.5、25nM)T<,1>作用HeLa细胞48h后，各给药组细胞蛋白含量显著降低。T<,1>25nM作用HeLa细胞48h后，荧光显微镜和电镜观察均可观察到典型的细胞凋亡的形态学变化，DNA琼脂糖凝胶电泳呈特征性细胞凋亡的“梯状”条带(ladder)。流式细胞仪检测表明，小于25nM浓度给药组(6.25、12.5nM)可使HeLa细胞的细胞周期阻滞于G<,1>／G<,0>期；T<,1>25nM作用48h后，细胞周期阻滞于G<,2>／M期，细胞凋亡率达到13.30％。用SABC法检测细胞bc1-2和bax蛋白表达水平结果显示，T<,1>6.25、12.5、25nM可使HeLa细胞的bc1-2蛋白表达减少，而bax蛋白表达增加。罗丹明荧光染色后，流式细胞仪检测发现T<,1>6.25、12.5、25nM均可使HeLa细胞的线粒体跨膜电位下降，T<,1>25nM作用HeLa细胞不同时间(0、3、6、12、24、48h)，在3h时即可检测到细胞线粒体跨膜电位的下降。Caspase比色法检测结果表明，T<,1>6.25、12.5、25nM组细胞caspase-3活性显著增强，T<,1>25nM处理HeLa细胞的时间进程表明，细胞caspase-3活性在3h开始增强，12h升至最强。预先经caspase-3抑制剂DEVD-CH0(1μM)处理4h，不增加其后T<,1> 理的HeLa细胞的存活率，而预先以广谱caspase抑制剂z-VAD-fmk(100μM)处理2h，可显著提高其后以T<,1>处理48h HeLa细胞的存活率。
结论：T<,1>可抑制HeLa细胞增殖，并通过下调细胞bc1-2蛋白表达，上调bax蛋白表达，降低线粒体跨膜电位，活化caspase-3，诱导细胞凋亡。