【摘 要】
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近年来,一种新型鹅细小病毒(GPV)在我国北方各省鸭群中出现并流行,导致发病鸭群出现短喙凸舌,生长迟缓等症状,命名为鸭短喙侏儒综合征(BADS)。本研究建立了一种基于新型GPV病
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近年来,一种新型鹅细小病毒(GPV)在我国北方各省鸭群中出现并流行,导致发病鸭群出现短喙凸舌,生长迟缓等症状,命名为鸭短喙侏儒综合征(BADS)。本研究建立了一种基于新型GPV病毒VP3结构蛋白的间接酶联免疫吸附实验,检测血清中的GPV抗体。大肠杆菌表达的GPV-VP3衣壳蛋白经包涵体粗纯化及镍柱纯化,Western blot实验结果显示纯化后的蛋白可与GPV抗体反应。通过条件优化:抗原包被最适浓度为100 ng/孔,4℃过夜包被;使用复合封闭液封闭2 h;最佳一抗稀释倍数为1:640,作用时间为1 h;辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体稀释倍数为1:10000,二抗反应时间为1 h;TMD显色时间为15 min,建立了一种基于VP3蛋白检测新型GPV抗体的间接ELISA方法。特异性检测显示,该方法不与新城疫病毒、鸭肝炎病毒、鸭源呼肠孤病毒、禽流感病毒和传染性法氏囊病毒有交叉反应;灵敏性检测结果显示:待测血清10240倍稀释后,仍可良好检出GPV特异性抗体;临床样品检测评价显示:80份血清样本用血清中和试验(SN)和建立的ELISA方法平行检测。结果显示两种方法检测都为阳性的有32份,阴性的有48份,符合率为88.75%。该VP3-ELISA方法有高灵敏度和特异性,是一种检测血清中GPV抗体的有效的血清学检测方法。
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