目的:建立酸枣仁黄酮部位质量控制方法;研究酸枣仁黄酮部位不同配伍及配比对抑郁失眠模型小鼠行为学影响及其抗抑郁作用机制。通过酸枣仁黄酮部位不同配伍的谱-效相关性分析指认出药效成分,进而将酸枣仁黄酮部位进行分离得到药效单体成分;初步考察主要的单体成分组合的抗抑郁失眠药效和有效剂量并进行转录组生物信息分析,为阐明酸枣仁抗抑郁失眠共病显效成分及作用机制奠定基础。方法:1.采用高效液相色谱法建立酸枣仁黄酮部位指纹图谱,并以液质联用法鉴定黄酮部位指纹图谱中的特征成分,再以HPLC法测定其中2个主要黄酮类成分含量。2.应用不同应激刺激建立抑郁失眠小鼠模型,评价不同黄酮配伍药物对小鼠解郁安神作用效果,采用酶联免疫分析法测定小鼠脑内Glu、GABA、BDNF水平;应用SPSS进行酸枣仁黄酮部位不同配伍和配比组合的谱-效相关性分析;采用高速逆流色谱仪分离酸枣仁黄酮成分。3.观察不同单体成分配伍组合对抑郁失眠小鼠解郁安神作用效果,采用酶联免疫分析法测定抑郁失眠小鼠脑内Glu、GABA、BDNF含量;以HPLC分析法测定不同成分配伍后含量的变化,初步考察药物分子可能存在的体外相互影响。应用高通量测序技术分析经药物干预治疗后小鼠脑组织的差异基因表达,通过Pathway富集了解差异表达基因参与的主要信号通路。结果:1.采用HPLC法建立酸枣仁黄酮部位指纹图谱,选择斯皮诺素作为参照峰,对10批样品进行比对共标定10个共有峰,以液质联用分析法鉴定出指纹图谱中8个黄酮成分和1个生物碱成分,通过测定不同批次黄酮部位中2个主要黄酮成分的含量,初步确定斯皮诺素含量应大于161.53 mg/g,6′′′-阿魏酰斯皮诺素含量应大于52.71 mg/g。2.从抑郁失眠小鼠行为学指标分析可知,生物碱-黄酮(1:14)中剂量组和生物碱-黄酮(1:12)低剂量组均能很好的发挥抗抑郁失眠作用;药效学实验结果表明,酸枣仁生物碱与黄酮(1:12)低剂量组和生物碱-黄酮(1:14)中剂量组均可显著改善抑郁失眠小鼠症状,其解郁安神作用与平衡脑内Glu与GABA水平、增加脑源性神经营养因子等机制相关。根据指纹图谱与药效指标的Spearman相关分析、灰色相关度分析和多元回归分析结果综合分析指认出,酸枣仁黄酮成分如维采宁II、牡荆素葡萄糖苷、斯皮诺素、6’’’-对羟基苯甲酰斯皮诺素和6’’’-阿魏酰斯皮诺素及生物碱类成分木兰花碱同药效指标具有很强的相关性;根据酸枣仁黄酮的性质将黄酮成分进行分离,选定正丁醇-乙酸乙酯-水(2:3:5)为溶剂系统,分离得到三种化合物,并指认出化合物1为木兰花碱,化合物2为斯皮诺素,化合物3为6’’’-阿魏酰斯皮诺素。3.三成分配伍组与四成分配伍组均能够改善抑郁失眠小鼠的症状,其中以木兰花碱28mg/kg+斯皮诺素64mg/kg+6’’’-阿魏酰斯皮诺素24mg/kg配伍组的两种神经递质的比值更接近空白组小鼠;HPLC分析结果显示,相对于木兰花碱和斯皮诺素的配伍,加入6’’’-阿魏酰斯皮诺素可以使木兰花碱和斯皮诺素的峰面积值出现一定程度下降。高通量测序技术分析结果发现4个基因即ENSMUSG00000090698、ENSMUSG 00000081824、ENSMUSG00000062202和ENSMUSG0000002 6516在表达上出现明显差异,涉及4条代谢通路Ribosome biogenesis in eukaryotes、Oxidative phosphorylation、Parkinson’s disease和Non-alcoholic fatty liver disease(NAFLD)。结论:根据不同批次酸枣仁黄酮部位指纹图谱的定性特征和黄酮特征成分含量的定量信息,初步建立了酸枣仁黄酮质量控制标准,为酸枣仁黄酮部位制备的标准化和规范化提供了科学依据和标准。药效学实验结果表明,酸枣仁生物碱-黄酮(1:12)低剂量组和生物碱-黄酮(1:14)中剂量组均可显著改善抑郁失眠小鼠症状,其解郁安神作用与平衡脑内Glu与GABA水平、增加脑源性神经营养因子等机制相关;通过谱-效相关性分析共确认6个与药效作用相关的主要成分,以高速逆流色谱法可以实现对酸枣仁黄酮部位一次分离同时获得3个较高纯度化合物,分别为木兰花碱、斯皮诺素、6’’’-阿魏酰斯皮诺素,该方法回收率高、操作简便、分离量大;木兰花碱28mg/kg+斯皮诺素64mg/kg+6’’’-阿魏酰斯皮诺素24mg/kg(三成分配伍组)抗抑郁失眠效果优于四成分配伍组,其作用机制可能与调控4个基因的差异性表达有关。